Phytomedicine執(zhí)行主編何蓉蓉教授團(tuán)隊(duì)揭示烏蛇止癢丸調(diào)控ALOX15改善特應(yīng)性皮炎

特應(yīng)性皮炎是一類反復(fù)發(fā)作的慢性炎癥性皮膚病，常見(jiàn)表現(xiàn)包括紅斑、濕疹樣皮損、皮膚干燥和劇烈瘙癢。很多患者都有類似經(jīng)歷：一段時(shí)間情緒緊張、睡眠不好，或者長(zhǎng)期處在壓力狀態(tài)下，皮損和瘙癢就會(huì)明顯加重。過(guò)去，人們多從免疫紊亂、皮膚屏障受損和神經(jīng)內(nèi)分泌異常來(lái)解釋這種現(xiàn)象，但心理應(yīng)激究竟怎樣放大皮膚炎癥，一直缺少更具體的分子證據(jù)。

近日，暨南大學(xué)藥學(xué)院何蓉蓉教授等在 Phytomedicine 發(fā)表題為《Oral Chinese Patent Medicine Alleviates Atopic Dermatitis by Regulating ALOX15-Derived Oxylipins Disorder》的研究論文。研究發(fā)現(xiàn)，口服中成藥烏蛇止癢丸能夠緩解DNCB誘導(dǎo)的特應(yīng)性皮炎樣癥狀，也能改善心理應(yīng)激加重后的皮損、瘙癢和免疫異常。機(jī)制上，應(yīng)激會(huì)上調(diào)皮膚中的ALOX15，擾亂氧化脂質(zhì)介質(zhì)譜，增加15-HETE等促炎代謝物，進(jìn)而推動(dòng)炎癥加重。烏蛇止癢丸則可抑制ALOX15相關(guān)氧脂素紊亂，其中活性成分升麻素能夠直接結(jié)合并抑制ALOX15活性。

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烏蛇止癢丸可改善特應(yīng)性皮炎模型癥狀與免疫異常

研究團(tuán)隊(duì)首先對(duì)烏蛇止癢丸進(jìn)行UHPLC-MS分析，共鑒定出24種主要成分，為后續(xù)藥效和機(jī)制研究提供了質(zhì)量基礎(chǔ)。在常規(guī)DNCB誘導(dǎo)的特應(yīng)性皮炎小鼠模型中，模型小鼠出現(xiàn)明顯背部紅斑、干燥、增厚、抓撓增多和耳腫脹。給予烏蛇止癢丸后，小鼠皮炎臨床評(píng)分下降，背部皮損減輕，皮膚含水量恢復(fù)，10分鐘內(nèi)抓撓次數(shù)減少，耳厚度和耳重量也明顯降低。HE染色顯示，模型組表皮明顯增厚，并伴有角化過(guò)度；烏蛇止癢丸處理后，表皮增生和皮膚組織損傷均有所緩解。

特應(yīng)性皮炎并不只是皮膚局部問(wèn)題，還伴隨系統(tǒng)免疫失衡。研究發(fā)現(xiàn)，DNCB處理后，小鼠出現(xiàn)胸腺萎縮和脾臟增大，提示免疫狀態(tài)發(fā)生異常。流式細(xì)胞術(shù)顯示，模型小鼠Th1和Th2細(xì)胞比例失衡，外周血白細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞增加，血清IgE水平升高。烏蛇止癢丸處理后，這些異常均得到改善。甲苯胺藍(lán)染色進(jìn)一步顯示，DNCB會(huì)導(dǎo)致皮損部位肥大細(xì)胞大量浸潤(rùn)，而烏蛇止癢丸可減少肥大細(xì)胞聚集。皮膚組織中Tnfα、Ifng、Il4和Tslp等炎癥因子表達(dá)也被明顯下調(diào)。

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心理應(yīng)激通過(guò)ALOX15通路加重特應(yīng)性皮炎

為了模擬心理應(yīng)激對(duì)皮炎的影響，研究團(tuán)隊(duì)在DNCB模型基礎(chǔ)上加入慢性束縛應(yīng)激。結(jié)果顯示，應(yīng)激顯著加重皮炎表現(xiàn)，小鼠背部皮損更嚴(yán)重，瘙癢和耳腫脹進(jìn)一步增加，表皮角化和肥大細(xì)胞浸潤(rùn)更加明顯。免疫層面，應(yīng)激使Th1細(xì)胞比例下降、Th2細(xì)胞比例升高，Th1和Th2平衡進(jìn)一步被打破。皮膚中Tnfα和Il1β表達(dá)也明顯升高。這說(shuō)明心理應(yīng)激確實(shí)會(huì)通過(guò)免疫紊亂和局部炎癥反應(yīng)，放大特應(yīng)性皮炎病情。

這項(xiàng)研究比較有意思的一點(diǎn)，是把應(yīng)激加重皮炎和氧脂素代謝異常聯(lián)系了起來(lái)。氧脂素是一類由多不飽和脂肪酸轉(zhuǎn)化而來(lái)的活性脂質(zhì)介質(zhì)，參與炎癥和免疫穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié)。靶向氧脂素脂質(zhì)組學(xué)顯示，對(duì)照組、DNCB組和應(yīng)激加DNCB組的皮膚氧脂素譜明顯分離。應(yīng)激后，多個(gè)促炎氧脂素顯著升高，其中15-HETE變化尤為突出。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，這些升高的脂質(zhì)介質(zhì)主要來(lái)自ALOX15相關(guān)代謝通路。

隨后，研究團(tuán)隊(duì)檢測(cè)了相關(guān)代謝酶。結(jié)果顯示，應(yīng)激顯著上調(diào)皮膚Alox15 mRNA和ALOX15蛋白表達(dá)，而Alox5和Ptgs2沒(méi)有出現(xiàn)同樣明顯的變化。相關(guān)性分析顯示，Alox15表達(dá)與Tnfα、Il1β等炎癥基因正相關(guān)，15-HETE水平也與炎癥因子表達(dá)呈正相關(guān)。也就是說(shuō)，應(yīng)激并不是籠統(tǒng)地增強(qiáng)炎癥，而是可能通過(guò)ALOX15驅(qū)動(dòng)的氧脂素紊亂，形成一條從心理應(yīng)激到皮膚炎癥加重的代謝通路。

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烏蛇止癢丸改善應(yīng)激加重的皮炎癥狀與代謝紊亂

在應(yīng)激加重的特應(yīng)性皮炎模型中，烏蛇止癢丸同樣表現(xiàn)出明確療效。給藥后，小鼠SCORAD評(píng)分下降，背部皮損改善，皮膚含水量增加，抓撓行為減少，耳腫脹減輕。HE染色顯示，烏蛇止癢丸可緩解應(yīng)激狀態(tài)下更嚴(yán)重的表皮增厚和角化過(guò)度。同時(shí)，烏蛇止癢丸改善了胸腺萎縮和脾臟增大，恢復(fù)Th1和Th2比例，降低外周白細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞比例，并劑量依賴性降低血清IgE。皮損中肥大細(xì)胞浸潤(rùn)減少，Tnfα、Ifng、Il4和Tslp表達(dá)下降，說(shuō)明它對(duì)局部炎癥和系統(tǒng)免疫失衡都有調(diào)節(jié)作用。

機(jī)制驗(yàn)證進(jìn)一步表明，烏蛇止癢丸可抑制ALOX15及其相關(guān)氧脂素異常。qPCR和Western blot顯示，烏蛇止癢丸顯著降低應(yīng)激加DNCB小鼠皮損中ALOX15的mRNA和蛋白水平。皮膚脂質(zhì)介質(zhì)PCA、火山圖和熱圖分析也顯示，烏蛇止癢丸使應(yīng)激誘導(dǎo)的氧脂素紊亂明顯回落，并降低15-HETE等ALOX15相關(guān)代謝物水平。這說(shuō)明烏蛇止癢丸并不只是下調(diào)炎癥因子，還可能從脂質(zhì)介質(zhì)源頭削弱應(yīng)激帶來(lái)的炎癥放大信號(hào)。

升麻素是烏蛇止癢丸中直接抑制ALOX15的活性成分

為了尋找直接作用成分，研究團(tuán)隊(duì)選取烏蛇止癢丸中的13種代表性成分與ALOX15進(jìn)行分子對(duì)接。結(jié)果顯示，多種成分具有結(jié)合潛力，其中升麻素表現(xiàn)突出。分子動(dòng)力學(xué)模擬顯示，ALOX15與升麻素形成的復(fù)合物在模擬過(guò)程中保持穩(wěn)定，配體沒(méi)有明顯脫離結(jié)合口袋。CETSA實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證明，升麻素可直接結(jié)合ALOX15并改變其熱穩(wěn)定性。更重要的是，重組ALOX15酶活實(shí)驗(yàn)顯示，升麻素能夠直接抑制ALOX15活性，減少15-HETE生成。

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研究結(jié)論

總之，該研究提出了一條較為清晰的特應(yīng)性皮炎應(yīng)激加重機(jī)制。心理應(yīng)激上調(diào)皮膚ALOX15，推動(dòng)15-HETE等氧脂素異常升高，隨后增強(qiáng)肥大細(xì)胞浸潤(rùn)、Th1和Th2失衡、IgE升高以及炎癥因子釋放，最終加重皮損和瘙癢。烏蛇止癢丸通過(guò)抑制ALOX15及其下游氧脂素紊亂，幫助恢復(fù)免疫穩(wěn)態(tài)并緩解皮膚炎癥。其中，升麻素是直接靶向ALOX15的重要活性成分。該研究為烏蛇止癢丸治療特應(yīng)性皮炎提供了現(xiàn)代藥理學(xué)證據(jù)，也把“應(yīng)激、ALOX15、氧脂素、炎癥”這條通路推到了更值得關(guān)注的位置。

https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0944711326007579?__cf_chl_f_tk=kU_.wmjVmaxUV3NuIDUSB4YyZ82SzwRTGNa1JbCUQ2Q-1783062240-1.0.1.1-37odFRR3XwLpQHjkBVNPBskPCxuHbDLgfSgyUP3031I

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