J Ethnopharmacol (IF=6.8)｜芎芷祛風止痛顆粒抗慢性偏頭痛：靶向HMGB1/TRPV1/MAPK軸，緩解痛覺過敏與中樞神經炎癥！(丁選勝/韓冰團隊)

2026年7月3日，中國藥科大學基礎醫學與臨床藥學院丁選勝教授團隊，聯合黑龍江濟仁藥業韓冰團隊，在Journal of Ethnopharmacology （中科院2區，IF=6.8）在線發表題為 “Xiongzhi Qufeng Zhitong Granule alleviates nitroglycerin-induced migraine-like nociception and central neuroinflammation by regulating the HMGB1 / TRPV1 / MAPK signaling axis” 的研究論文。該文于2026年4月23日投稿，2026年6月22日修回，2026年6月30日接收。

慢性偏頭痛（chronic migraine，CM）是一類具有高度致殘性的神經炎癥相關疾病，現有治療仍存在療效持續時間有限、不良反應影響依從性等問題。芎芷祛風止痛顆粒（Xiongzhi Qufeng Zhitong Granules，XZQF）來源于臨床中藥處方，由川芎、白芷、柴胡、石菖蒲、遠志、葛根和藁本組成，已在臨床應用多年，但其抗偏頭痛作用及分子機制尚未被系統闡明。

該研究采用硝酸甘油（nitroglycerin，NTG）誘導的慢性偏頭痛大鼠模型，結合行為學檢測、Von Frey痛閾檢測、甩尾潛伏期（tail-flick latency，TFL）檢測、ELISA、H&E染色、網絡藥理學、分子對接、免疫熒光、免疫組化和Western blot等方法，系統評價XZQF對偏頭痛樣行為、痛覺過敏、三叉神經脊束核尾側亞核（trigeminal nucleus caudalis，TNC）腦組織損傷以及中樞神經炎癥的影響。

結果顯示，XZQF可提高NTG誘導CM大鼠的足底和眶周痛閾及TFL，減少抓頭、爬籠等偏頭痛樣行為；降低血清和TNC腦組織中IL-1β、IL-6、TNF-α、PGE2、CGRP、VIP、iNOS、NO等炎癥/疼痛/血管活性相關指標，同時恢復IL-10、β-EP和5-HT水平。機制上，XZQF可下調TNC腦組織中CGRP、TRPV1、c-Fos、COX-2和HMGB1表達，并抑制MEK/MAPK磷酸化，提示其抗CM作用可能與調控HMGB1/TRPV1/MAPK信號軸有關。

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【摘 要】

民族藥理學相關性：慢性偏頭痛（chronic migraine，CM）是一種患病率較高的神經炎癥性疾病，現有治療選擇仍然有限。芎芷祛風止痛顆粒（Xiongzhi Qufeng Zhitong Granules，XZQF）是一種臨床使用的傳統中藥制劑，顯示出較好的抗偏頭痛潛力和安全性特征；然而，其系統療效及潛在機制仍未充分明確。

研究目的：本研究旨在探討XZQF對硝酸甘油（NTG）誘導的CM大鼠模型的保護作用，并圍繞HMGB1/TRPV1/MAPK信號通路揭示其潛在機制。

材料與方法：研究首先建立CM大鼠模型，并通過行為學檢測、酶聯免疫吸附實驗（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）和組織病理學染色分析評估XZQF對CM的作用。隨后，研究結合網絡藥理學分析、免疫熒光、免疫組織化學和Western blot，進一步驗證XZQF調控HMGB1/TRPV1/MAPK信號軸以對抗CM的分子機制。

結果：行為學實驗、ELISA檢測和組織病理學評估共同顯示，XZQF可顯著維持體重狀態并恢復痛閾，降低血清和腦組織中促炎細胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α，以及PGE2、CGRP、VIP、NO、iNOS等疼痛和血管活性相關介質水平，同時減輕偏頭痛相關腦組織損傷。網絡藥理學鑒定出STAT3、NFKB1、JUN、PTGS2、IL1B等核心靶點，以及阿魏酸、洋川芎內酯E/F、新蛇床內酯、甲基丁香酚等關鍵活性成分；富集分析提示其可能涉及MAPK、PI3K-Akt和cAMP等信號通路。免疫熒光、免疫組化和Western blot進一步驗證，XZQF可顯著抑制CGRP、TRPV1、c-Fos、COX-2和HMGB1表達，并降低MEK和MAPK的磷酸化水平。

結論：上述結果表明，XZQF可通過抑制HMGB1/TRPV1/MAPK信號軸介導的中樞神經炎癥，對CM發揮鎮痛、抗炎和血管調節作用。本研究為理解XZQF抗CM活性建立了機制框架，并支持其作為CM干預藥物開展進一步研究。

01

研究背景及科學問題

慢性偏頭痛是一種致殘性神經系統疾病，以反復頭痛發作為主要特征，發病機制復雜。臨床上，CM通常定義為每月頭痛發作超過15天，并持續至少3個月。其臨床表現包括單側或雙側中重度搏動性疼痛，體力活動后加重，發作可持續4至72小時，并常伴有畏光、畏聲、惡心或嘔吐。近年來，CM發生率呈上升趨勢，給醫療系統和家庭帶來顯著社會經濟負擔。目前，非特異性鎮痛藥和偏頭痛特異性藥物仍是主要一線治療選擇，但療效持續時間有限以及不良反應問題影響長期治療依從性，因此有必要尋找新的治療藥物。

偏頭痛在中醫中有較早記載，常歸屬于“頭風”范疇，表現為反復、劇烈的單側或雙側頭痛，起病和緩解較突然，并可伴隨周期性嘔吐或腹痛。XZQF來源于國醫大師陸放教授的臨床處方，已在臨床使用多年。該方由7味藥組成：川芎（Chuanxiong，Ligusticum chuanxiong Hort，CX，25 g）、白芷（Bai Zhi，Angelica dahurica (Hoffm.)，BZ，5 g）、柴胡（Chai Hu，Bupleuri Radix，CH，5 g）、石菖蒲（Shi Chang Pu，Acorus Tatarinowii Rhizoma，SCP，2.5 g）、遠志（Yuan Zhi，Radix Polygalae，YZ，2.5 g）、葛根（Ge Gen，Pueraria lobata (Willd.) Ohwi，GG，2.5 g）和藁本（Gao Ben，Ligustici Rhizoma et Radix，GB，2.5 g）。該方具有祛風活血、化瘀止痛之功，用于針對“風邪上擾、瘀阻腦絡”所對應的持續反復頭痛、局部疼痛和刺痛等CM相關表現。

方中川芎載于《神農本草經》，因其活血、行氣、祛風、止痛作用而被用于頭痛治療。現代研究也提示川芎具有心血管和神經保護、抗炎、抗糖尿病、抗骨質疏松、抗菌、抗衰老、抗氧化和免疫調節等多種藥理活性。白芷和柴胡在臨床應用歷史悠久，在XZQF中被視為臣藥。白芷在《本草綱目》中被記載具有“祛風止痛”作用，尤其適用于風寒頭痛，并可用于感冒、頭痛和牙痛。石菖蒲與遠志作為佐藥，可協同交通心腎、益智開竅；葛根和藁本作為引經藥，其中藁本用于巔頂痛，葛根用于項背強痛，可幫助引導其他藥物至相關經絡。總體來看，這些證據支持XZQF用于CM治療具有一定中醫理論基礎，但其抗偏頭痛分子機制仍需進一步研究。

偏頭痛發病機制復雜，涉及神經血管功能障礙、神經遞質失衡，例如5-羥色胺（5-hydroxytryptamine，5-HT）和降鈣素基因相關肽（calcitonin gene-related peptide，CGRP），以及遺傳易感性和離子通道異常等。現有研究表明，三叉神經脊束核尾側亞核（TNC）區域神經元興奮所導致的中樞敏化，是CM發生發展的重要環節。高遷移率族蛋白B1（high mobility group box 1，HMGB1）是一種廣泛表達的核蛋白，在細胞損傷或炎癥誘導后釋放至細胞外，可發揮促炎刺激作用。HMGB1還能激活Toll樣受體（Toll-like receptors，TLRs）和晚期糖基化終末產物受體（receptor for advanced glycation end products，RAGE），促進神經元、膠質細胞和免疫細胞之間相互作用，最終參與神經源性炎癥。

瞬時受體電位香草酸亞型1（transient receptor potential vanilloid 1，TRPV1）是瞬時受體電位通道蛋白家族成員，也是一種非選擇性陽離子通道，可感知高溫或辣椒素等誘導的損傷刺激，并參與疼痛感知和傳遞。TRPV1被認為在偏頭痛發作過程中具有重要信號調控作用。研究顯示，TRPV1在感覺損傷性神經纖維，尤其是質膜中高度表達，慢性偏頭痛患者三叉神經纖維中的TRPV1表達也升高。TRPV1可促進神經源性炎癥和傷害性感受信號傳導，并激活PI3K-AKT和MAPK等下游通路，從而增加CGRP、P物質（substance P，SP）、TNF-α、IL-1β等炎癥和疼痛相關因子的產生。

值得注意的是，在中樞神經系統中，TRPV1激活可升高HMGB1表達；反過來，二硫鍵型HMGB1也可通過NF-κB依賴方式上調TRPV1，從而放大機械性痛敏。總體來看，偏頭痛或CM誘導的HMGB1和TRPV1激活，可能進一步介導PI3K-AKT和MAPK信號表達，加重神經源性炎癥和敏化，促進炎癥因子和疼痛相關因子表達，最終導致中樞痛覺過敏和異常性疼痛。因此，作者提出假設：HMGB1、TRPV1及其相關MAPK信號在CM中具有重要作用，而XZQF可能通過調控HMGB1、TRPV1和MAPK信號通路發揮治療CM的作用。

02

重要發現及亮點

XZQF質量標準特征圖譜的建立

研究首先基于高效液相色譜（high-performance liquid chromatography，HPLC）建立XZQF質量標準特征圖譜。分析結果顯示，XZQF供試品色譜圖應呈現11個特征峰，其中以參照物保留時間對應峰作為峰8（s）。各特征峰相對于峰8（s）的相對保留時間應位于規定值±10%范圍內，具體包括峰1為0.378、峰2為0.561、峰3為0.631、峰4為0.677、峰5為0.696、峰6為0.722、峰7為0.835、峰9為1.718、峰10為1.905、峰11為1.982。圖中標注顯示，峰3為葛根素（puerarin），峰8s為阿魏酸（ferulic acid），峰10為oxypeucedanin hydrate。為進一步完善并驗證質量標準圖譜，研究者檢測了4批XZQF中試樣品，結果顯示4批樣品中的色譜峰與已建立的質量標準圖譜峰位一一對應，提示批間一致性較好。

圖1：XZQF質量標準圖譜的建立。（A）XZQF樣品質量標準圖；（B）4批XZQF中試樣品的色譜圖。注：本圖中，S1代表XZQF中試樣品批號20250601的色譜圖，S2代表XZQF中試樣品批號20250602的色譜圖，S3代表XZQF中試樣品批號20250603的色譜圖，S4代表XZQF中試樣品批號20250604的色譜圖。

XZQF改善NTG誘導CM大鼠的偏頭痛樣行為并提高痛閾

研究采用NTG誘導建立CM大鼠模型，用于評價XZQF療效。大鼠分為對照組、模型組、XZQF低劑量組（XZQF-L，1.4397 g/kg）、XZQF中劑量組（XZQF-M，2.8793 g/kg）、XZQF高劑量組（XZQF-H，5.7586 g/kg）、正天丸組（Zhengtianwan，ZTW，1.8510 g/kg）和布洛芬組（0.0823 g/kg）。除對照組和模型組給予等體積0.5% CMC-Na外，其余組每日灌胃給藥1次，連續21天。給藥第6天后，除對照組外，其余大鼠隔日腹腔注射NTG（10 mg/kg），共5次，以建立CM樣模型。

結果顯示，各組大鼠體重、平均攝食量和飲水量無明顯差異。XZQF給藥后，心、肝、脾、肺、腎、腦和胸腺等臟器系數也未較模型組出現明顯改變，提示在該實驗條件下未觀察到明顯系統性毒性信號。

圖2：XZQF對NTG刺激CM大鼠體重、攝食量、飲水量及臟器指數的影響和研究設計（n=10）。（A）研究流程。（B–D）XZQF對大鼠體重、攝食量和飲水量的影響。（E–K）XZQF對大鼠心、肝、脾、肺、腎、腦重量和胸腺等臟器系數的影響。對照組和模型組之間采用Student’s t檢驗分析，多組比較采用ANOVA分析。數據以均值±標準差（Mean ± SD）表示。XZQF-L：芎芷祛風止痛顆粒低劑量組；XZQF-M：芎芷祛風止痛顆粒中劑量組；XZQF-H：芎芷祛風止痛顆粒高劑量組；ZTW：正天丸；NTG：硝酸甘油。

行為學結果顯示，NTG注射后，模型大鼠出現抓頭、爬籠、畏光等典型偏頭痛樣行為。與對照組相比，模型組大鼠足底痛閾、眶周痛閾和TFL均顯著降低，提示其出現痛覺過敏和偏頭痛樣痛覺反應。XZQF處理可劑量依賴性提高足底和眶周痛閾，并延長TFL，同時減少偏頭痛樣行為。正天丸和布洛芬也可改善NTG刺激大鼠的痛閾和偏頭痛樣行為。比較而言，XZQF在改善痛閾、TFL和偏頭痛樣行為方面表現出優于兩個陽性對照藥物的趨勢。

圖3：XZQF改善NTG誘導CM大鼠足底和眶周痛閾、TFL以及偏頭痛樣行為的作用（n=10）。（A）XZQF在給藥干預第9、15和21天對足底痛閾的改善作用。（B）XZQF在給藥干預第9、15和21天對眶周痛閾的改善作用。（C）給藥干預第9、15和21天TFL的升高情況。（D）XZQF在給藥干預第6、9、12、15、17和21天對偏頭痛樣行為的改善作用，上述時間點定義為測試1至測試6。（E–J）XZQF在給藥期間測試1至測試6對大鼠偏頭痛樣抓頭行為評分的影響。對照組和模型組之間采用Student’s t檢驗分析，多組比較采用ANOVA分析。數據以均值±標準差表示。*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001，****P<0.0001 vs. 對照組；<0.05，#<0.01，##<0.001，###<0.0001 vs. 模型組。XZQF-L：芎芷祛風止痛顆粒低劑量組；XZQF-M：芎芷祛風止痛顆粒中劑量組；XZQF-H：芎芷祛風止痛顆粒高劑量組；ZTW：正天丸。

XZQF改善NTG導致的TNC腦組織損傷

為進一步觀察CM模型相關腦組織病理改變，研究者對TNC腦組織進行H&E染色。對照組神經元排列較為整齊，邊界清晰，未見明顯結構破壞。相反，NTG誘導模型組表現為神經元數量減少、炎癥細胞浸潤、細胞腫脹和排列紊亂，并可見較廣泛空泡樣改變。XZQF干預后，模型相關組織病理損傷減輕，表現為炎癥細胞浸潤減少、纖維化程度下降，以及神經元細胞間隙空泡減少。正天丸和布洛芬陽性對照組同樣顯示減輕NTG誘導TNC腦組織損傷的作用。

圖4：XZQF對NTG刺激CM大鼠TNC腦組織病理學改變的分析（n=10）。（A）對照組TNC腦組織代表性H&E染色結果。（B）NTG誘導模型組TNC腦組織代表性H&E染色結果。（C–E）XZQF-L、XZQF-M和XZQF-H組TNC腦組織代表性H&E染色結果。（F–G）ZTW和布洛芬陽性藥物組TNC腦組織代表性H&E染色結果。（H）各組H&E染色評分評價。對照組和模型組之間采用Student’s t檢驗分析，多組比較采用ANOVA分析。數據以均值±標準差表示。***P<0.001，****P<0.0001 vs. 對照組；<0.05，###<0.0001 vs. 模型組。XZQF-L：芎芷祛風止痛顆粒低劑量組；XZQF-M：芎芷祛風止痛顆粒中劑量組；XZQF-H：芎芷祛風止痛顆粒高劑量組；ZTW：正天丸。

XZQF調節血清和TNC腦組織中的炎癥因子、疼痛介質和血管活性介質

研究進一步檢測血清和TNC腦組織中炎癥因子、疼痛相關介質和血管活性介質。結果顯示，與對照組相比，模型組血清和TNC腦組織中IL-1β、IL-6、TNF-α和PGE2水平顯著升高；抗炎因子IL-10、鎮痛相關介質β-EP以及5-HT水平下降。同時，CGRP、VIP、iNOS和NO等血管活性相關介質在血清和TNC腦組織中也顯著升高。

XZQF給藥后，IL-1β、IL-6、TNF-α、PGE2以及CGRP、VIP、iNOS、NO等指標在血清和TNC腦組織中均顯著下降；同時，IL-10、β-EP和5-HT水平升高。正天丸和布洛芬也對上述指標表現出調節作用。整體來看，XZQF在改善這些炎癥、疼痛和血管活性相關指標方面與布洛芬和正天丸相近，并在β-EP、5-HT和CGRP等部分參數上表現出一定優勢。

圖5：XZQF對NTG刺激大鼠血清和TNC腦組織中促炎因子及疼痛相關介質表達的影響（n=10）。（A–D）XZQF對NTG誘導大鼠血清和TNC腦組織中促炎因子IL-1β、IL-6、TNF-α以及抗炎介質IL-10表達的影響。（E–G）XZQF對NTG誘導大鼠血清和TNC腦組織中疼痛相關指標PGE2、β-EP和5-HT表達的影響。（H–K）XZQF對NTG誘導大鼠血清和TNC腦組織中血管活性相關介質CGRP、VIP、iNOS和NO表達的影響。對照組和模型組之間采用Student’s t檢驗分析，多組比較采用ANOVA分析。數據以均值±標準差表示。****P<0.0001 vs. 對照組；<0.05，#<0.01，##<0.001，###<0.0001 vs. 模型組。XZQF-L：芎芷祛風止痛顆粒低劑量組；XZQF-M：芎芷祛風止痛顆粒中劑量組；XZQF-H：芎芷祛風止痛顆粒高劑量組；ZTW：正天丸。

圖6：XZQF對NTG刺激大鼠血清和TNC腦組織中疼痛相關介質及血管活性介質表達的影響（n=10）。（A）XZQF對NTG誘導大鼠血清和TNC腦組織中疼痛相關指標5-HT表達的影響。（B–E）XZQF對NTG誘導大鼠血清和TNC腦組織中血管活性相關介質CGRP、VIP、iNOS和NO表達的影響。對照組和模型組之間采用Student’s t檢驗分析，多組比較采用ANOVA分析。數據以均值±標準差表示。****P<0.0001 vs. 對照組；<0.05，#<0.01，##<0.001，###<0.0001 vs. 模型組。XZQF-L：芎芷祛風止痛顆粒低劑量組；XZQF-M：芎芷祛風止痛顆粒中劑量組；XZQF-H：芎芷祛風止痛顆粒高劑量組；ZTW：正天丸。

網絡藥理學預測XZQF治療CM的活性成分和潛在靶點

為探索XZQF抗CM的潛在機制，研究者采用網絡藥理學方法進行分析。經數據庫檢索和篩選，共鑒定出104個活性成分，其中川芎20個、白芷28個、柴胡13個、遠志5個、石菖蒲18個、葛根4個、藁本16個。整合去重后，共預測到861個XZQF治療CM的潛在靶點。與此同時，研究者整合獲得3711個CM疾病靶點，并通過Venn分析得到422個XZQF治療CM的交集靶點。PPI分析顯示，STAT3、BCL2、JUN、MMP9、NFKB1、CASP3、ALB、AKT1、SRC、PTGS2、EGFR、IL1B、BCL2L1、CXCL8等位于前20位，可被視為XZQF改善CM的核心靶點。

圖7：CM疾病靶點、XZQF治療CM預測靶點，以及XZQF-CM共同靶點的PPI分析。（A）分別來自GeneCards、OMIM和DrugBank的CM預測靶點。（B）XZQF治療CM的交集靶點。（C）XZQF治療CM共同靶點的PPI分析。XZQF：芎芷祛風止痛顆粒；CM：慢性偏頭痛。

為進一步篩選XZQF治療CM的關鍵成分，研究者構建“方劑-成分-靶點”綜合互作網絡。該網絡包含508個節點和3889條邊。根據度值排序，篩選出洋川芎內酯E、洋川芎內酯F、阿魏酸、新蛇床內酯、甲基丁香酚、β-谷甾醇、洋川芎內酯A、(Z)-丁烯基苯酞、(E)-藁本內酯、Mandenol、細辛醚、洋川芎內酯C/I、Levistolide A、1,7-二甲氧基咫噸酮、Wallichilide、歐前胡素類成分等前20個候選關鍵成分。

GO功能和KEGG通路富集分析顯示，XZQF治療CM的共同靶點主要富集于信號轉導、RNA聚合酶II介導轉錄正調控、基因表達正調控、G蛋白偶聯受體信號通路、細胞群體增殖正調控、凋亡過程負調控以及炎癥反應等生物過程；細胞組分主要涉及質膜、胞質溶膠、細胞質、膜、核質和細胞外外泌體等；分子功能主要包括蛋白結合、同源蛋白結合、ATP結合、金屬離子結合、蛋白激酶活性和絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶活性等。KEGG通路方面，交集靶點主要集中于癌癥通路、神經活性配體-受體相互作用、鈣信號通路、PI3K-Akt信號通路、阿爾茨海默病、MAPK信號通路、cAMP信號通路以及脂質與動脈粥樣硬化等。

圖8：GO功能和KEGG通路富集分析。（A）GO功能中排名前20位的生物過程（biological process，BP）富集結果；（B）GO功能中排名前20位的細胞組分（cellular component，CC）富集結果；（C）GO功能中排名前20位的分子功能（molecular function，MF）富集結果；（D）排名前20位的KEGG通路富集結果。

分子對接進一步顯示，除甲基丁香酚與NFKB1之間結合能為?4.9 kcal/mol外，所選關鍵成分與核心靶點之間的對接結合能均低于?5.0 kcal/mol，提示具有較好的結合潛力。研究還考察了5個關鍵成分與c-Fos、CGRP、HMGB1、PTGS2和TRPV1等靶點的結合能力，結果顯示其與相關靶點具有較高對接能量。總體來看，這些結果提示，XZQF可能通過多成分協同作用調節核心靶點表達，從而發揮抗CM作用。

圖9：代表性化合物洋川芎內酯E、洋川芎內酯F、阿魏酸、新蛇床內酯和甲基丁香酚分別與核心靶點c-Fos、CGRP、HMGB1、PTGS2以及TRPV1的分子對接結果可視化。

XZQF調控NTG誘導CM大鼠TNC腦組織中CGRP、TRPV1、COX-2、c-Fos、5-HT1B和HMGB1表達

基于網絡藥理學和分子對接結果，研究者進一步采用免疫熒光和免疫組化驗證XZQF對關鍵蛋白的調控。免疫熒光結果顯示，與模型組相比，XZQF組TNC腦組織中CGRP和TRPV1表達呈劑量依賴性下降。正天丸和布洛芬陽性對照組中CGRP和TRPV1表達也較模型組下降。

圖10：免疫熒光評價XZQF對NTG刺激大鼠TNC腦組織中CGRP和TRPV1蛋白表達的影響。（A）XZQF對CGRP蛋白表達的影響；（B）XZQF對TRPV1蛋白表達的影響（n=3）。XZQF-L：芎芷祛風止痛顆粒低劑量組；XZQF-M：芎芷祛風止痛顆粒中劑量組；XZQF-H：芎芷祛風止痛顆粒高劑量組；ZTW：正天丸。（比例尺：25 μm，40×）。

免疫組化結果顯示，與模型組相比，XZQF干預后TNC腦組織中COX-2和c-Fos表達降低，提示其鎮痛作用可能與抑制COX-2和c-Fos表達有關。同時，模型組TNC腦組織中5-HT1B和HMGB1表達低于對照組，而XZQF干預后兩者表達呈升高趨勢，提示XZQF可能改善NTG誘導的相關分子耗竭或功能異常。正天丸和布洛芬也能顯著改善上述靶點表達變化。總體而言，這些結果表明，XZQF抗CM機制與調控TNC腦組織中CGRP、TRPV1、COX-2、c-Fos、5-HT1B和HMGB1表達有關。

圖11：免疫組織化學檢測XZQF對TNC腦組織中COX-2、c-Fos、5-HT1B和HMGB1蛋白表達的影響。（A）XZQF對COX-2蛋白表達的影響；（B）XZQF對c-Fos蛋白表達的影響；（C）XZQF對5-HT1B蛋白表達的影響；（D）XZQF對HMGB1蛋白表達的影響（n=3）。XZQF-L：芎芷祛風止痛顆粒低劑量組；XZQF-M：芎芷祛風止痛顆粒中劑量組；XZQF-H：芎芷祛風止痛顆粒高劑量組；ZTW：正天丸。（比例尺：25 μm，40×）。

XZQF通過調控HMGB1/TRPV1/MAPK信號通路緩解CM

Western blot結果顯示，與對照組相比，NTG注射后模型組TNC腦組織中HMGB1、COX-2、CGRP、TRPV1、c-Fos、cAMP、p-MEK和p-MAPK蛋白表達升高。XZQF干預后，這些蛋白表達均顯著下降。正天丸處理可顯著降低HMGB1、COX-2、CGRP、c-Fos和p-MAPK蛋白表達，但對TRPV1、cAMP和p-MEK表達降低不明顯；布洛芬可降低HMGB1、COX-2、TRPV1、c-Fos、cAMP、p-MEK和p-MAPK蛋白表達，但對CGRP蛋白表達無明顯影響。相比之下，XZQF對這些靶點表現出更全面的調節作用。總體而言，XZQF抗CM的潛在機制與調控HMGB1/TRPV1/MAPK信號通路密切相關。

圖12：Western blot檢測XZQF對NTG誘導CM大鼠TNC腦組織中HMGB1、COX-2、CGRP、TRPV1、c-Fos、cAMP、MEK、p-MEK、MAPK和p-MAPK蛋白表達的影響。對照組和模型組之間采用Student’s t檢驗分析，多組比較采用ANOVA分析。數據以均值±標準差表示。*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001，****P<0.0001 vs. 對照組；<0.05，#<0.01，##<0.001，###<0.0001 vs. 模型組（n=3）。XZQF-L：芎芷祛風止痛顆粒低劑量組；XZQF-M：芎芷祛風止痛顆粒中劑量組；XZQF-H：芎芷祛風止痛顆粒高劑量組；ZTW：正天丸。

機制示意圖總結

綜合行為學、組織病理學、網絡藥理學、分子對接和分子生物學驗證結果，研究提出：NTG誘導CM后，可激活TNC區域神經炎癥和疼痛信號，導致HMGB1、TRPV1、CGRP、COX-2、c-Fos、cAMP及MEK/MAPK磷酸化上調，并伴隨促炎因子、疼痛介質和血管活性介質紊亂。XZQF可通過抑制HMGB1/TRPV1/MAPK信號軸，降低IL-1β、IL-6、TNF-α、PGE2、CGRP、VIP、NO和iNOS等相關因子，恢復IL-10、β-EP和5-HT水平，從而緩解中樞神經炎癥、痛覺過敏和偏頭痛樣行為。

圖13：XZQF通過HMGB1/TRPV1/MAPK通路改善NTG誘導慢性偏頭痛大鼠的神經炎癥和疼痛的機制示意圖。

【貢獻】★★★★★

本研究證實，XZQF可顯著緩解NTG誘導慢性偏頭痛大鼠的異常性疼痛和神經炎癥，并下調促炎、血管活性和疼痛相關因子。網絡藥理學分析和分子驗證實驗均提示，XZQF的抗CM作用與調控HMGB1/TRPV1/MAPK通路有關。此外，在該動物實驗條件下，XZQF表現出較好的安全性，使其成為慢性偏頭痛治療候選藥物的潛在研究對象。總體而言，這些結果為開發XZQF作為CM臨床治療藥物提供了實驗依據，也為理解其抗CM機制提供了新思路。

需要注意的是，作者在討論中也指出，本研究仍存在一些局限。首先，目前結果主要來自動物體內模型，仍需要補充體外研究以解析細胞類型特異性機制。其次，炎癥、疼痛和血管活性介質的定量主要依賴ELISA，未來可結合流式細胞術、單分子成像等正交技術加強驗證。此外，網絡藥理學分析中的分子對接和活性成分預測結果仍需通過體外細胞模型等確認實驗進一步驗證。未來結合蛋白質組學、代謝組學、高通量測序，以及基因敲除/回補實驗，將有助于更全面闡明XZQF治療CM的機制圖譜。

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