Phytomedicine｜臨床對照+機制驗證：文冠果葉代茶飲降低尿酸，調控XOD/尿酸轉運體！(李敏慧/謝瑩—內蒙古自治區(qū)中醫(yī)醫(yī)院/廣州中醫(yī)藥大學)

2026年5月，內蒙古自治區(qū)中醫(yī)醫(yī)院李敏慧團隊、廣州中醫(yī)藥大學第二附屬醫(yī)院/中醫(yī)證候全國重點實驗室謝瑩團隊等，聯(lián)合內蒙古醫(yī)科大學、包頭醫(yī)學院、橫琴實驗室、內蒙古自治區(qū)阿魯科爾沁旗中醫(yī)醫(yī)院等單位，在Phytomedicine（中科院1區(qū)，2024 Impact Factor=8.3）在線發(fā)表題為“Evaluation of the clinical efficacy of Xanthoceras sorbifolium leaves in intervening in hyperuricemia and research on its uric acid-lowering mechanism”的研究論文。該文于2025年12月11日投稿，2026年4月22日修回，2026年5月10日接收，2026年5月15日在線發(fā)表。

該研究聚焦高尿酸血癥（HUA）這一常見代謝異常，圍繞藥食同源植物文冠果（Xanthoceras sorbifolium Bunge）葉的臨床降尿酸作用、安全性及其機制展開。研究首先開展了一項納入120例高尿酸血癥患者的隨機對照臨床試驗，其中60例患者飲用文冠果葉代茶飲，60例患者口服非布司他，干預時間均為4周。結果顯示，文冠果葉代茶飲與非布司他均可有效降低血清尿酸水平，二者尿酸降低率無統(tǒng)計學差異；同時，文冠果葉組未觀察到明顯肝腎損傷，提示其具有較好的臨床安全性。

在機制研究方面，作者結合患者血清蛋白組學、網(wǎng)絡藥理學篩選以及AML12肝細胞和HK-2腎小管上皮細胞體外驗證，發(fā)現(xiàn)PI3K/AKT通路和炎癥反應可能是文冠果葉發(fā)揮作用的重要環(huán)節(jié)。文冠果葉提取物及其關鍵活性成分槲皮苷（quercitrin）、蘆?。╮utin）和楊梅苷（myricitrin）可通過抑制肝臟黃嘌呤氧化酶（XOD）活性減少尿酸生成，并通過上調ABCG2/OAT1、下調GLUT9/URAT1調節(jié)腎臟尿酸轉運，促進尿酸排泄。值得注意的是，文冠果葉提取物對PI3K/AKT通路呈現(xiàn)組織選擇性調控：在肝細胞中抑制過度激活的PI3K/AKT/COX-2軸以減輕炎癥反應，在腎細胞中則通過激活PI3K/AKT通路抑制尿酸誘導的細胞凋亡。該研究為文冠果葉作為高尿酸血癥及其相關并發(fā)癥的天然干預方案提供了臨床和機制層面的科學證據(jù)。

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【摘要】

高尿酸血癥（hyperuricemia，HUA）是一種由尿酸代謝異常引起的代謝性疾病，也是痛風和腎臟疾病的常見危險因素。目前，高尿酸血癥的一線藥物治療主要包括黃嘌呤氧化酶（xanthine oxidase，XOD）抑制劑，如別嘌醇和非布司他，以及促尿酸排泄藥物，如苯溴馬隆。這些藥物能夠有效降低血清尿酸水平，但其臨床應用常受到不良反應限制，包括肝腎毒性、胃腸道反應和超敏反應等。因此，開發(fā)更安全、耐受性更好的干預方式仍具有現(xiàn)實需求。在這一背景下，具有多靶點機制和較好安全性特征的植物來源干預物受到越來越多關注。早期研究提示，傳統(tǒng)藥食同源植物文冠果（Xanthoceras sorbifolium Bunge，X. sorbifolium）葉可能具有治療 HUA 的潛力，但其臨床療效和作用機制仍需進一步明確。

本研究旨在評價文冠果葉管理 HUA 的臨床有效性和安全性，并探討其降尿酸及器官保護機制。研究開展了一項納入 120 例高尿酸血癥患者的隨機對照試驗，其中 60 例患者飲用文冠果葉茶，另 60 例患者口服非布司他，兩組干預時間均為 4 周。試驗期間檢測安全性指標和血清尿酸水平。此外，研究者對患者血清進行了蛋白組學分析，并結合網(wǎng)絡藥理學篩選潛在機制；同時在 AML12 肝細胞和 HK-2 腎小管上皮細胞損傷模型中進行體外驗證。研究采用 ELISA、Western blot 和流式細胞術等方法，評價文冠果葉提取物（X. sorbifolium extract，EX）對尿酸代謝、炎癥反應、細胞凋亡及相關信號通路的影響。

臨床試驗顯示，飲用文冠果葉代茶飲的患者和口服非布司他的患者均可有效降低血清尿酸水平，二者尿酸降低率無統(tǒng)計學差異。文冠果葉組患者未出現(xiàn)肝腎損傷，顯示出較好的安全性。蛋白組學和網(wǎng)絡藥理學結果提示，PI3K/AKT 通路和炎癥反應可能參與其作用機制。體外實驗顯示，文冠果及其關鍵活性成分槲皮苷（quercitrin）、蘆丁（rutin）和楊梅苷（myricitrin）可通過抑制肝臟 XOD 活性減少尿酸生成；同時通過調控腎臟尿酸轉運蛋白促進尿酸排泄，表現(xiàn)為上調 ABCG2/OAT1、下調 GLUT9/URAT1。文冠果還可通過抑制過度激活的 PI3K/AKT/COX-2 軸，在肝細胞中發(fā)揮抗炎作用；并通過激活 PI3K/AKT 通路抑制尿酸誘導的腎細胞凋亡，從而呈現(xiàn)一定組織選擇性。

研究認為，文冠果葉是一種對 HUA 具有干預效果且安全性較好的天然來源物質。其機制包括減少尿酸生成、促進尿酸排泄，并通過雙向調節(jié) PI3K/AKT 通路發(fā)揮器官保護作用。該研究為文冠果用于 HUA 及其相關并發(fā)癥的干預提供了科學依據(jù)。

01

研究背景及科學問題

高尿酸血癥（HUA）是一種由嘌呤代謝紊亂和/或尿酸（uric acid，UA）排泄能力不足引起的嘌呤代謝性疾病，其特征是血清尿酸水平升高。目前，HUA 被認為與慢性腎臟?。–KD）、痛風、心血管疾病、高血糖等多種代謝性疾病相關。異常升高的尿酸水平可誘導炎癥反應、氧化應激、線粒體功能障礙和細胞凋亡等多種病理生理效應，最終可能導致急性腎損傷、慢性腎功能異常和腎結石等并發(fā)癥。

人體內約三分之二的尿酸來源于內源性嘌呤代謝，剩余約三分之一來自食物攝入。嘌呤分解為尿酸的過程主要發(fā)生在肝臟，并依賴黃嘌呤氧化酶（XOD）參與。由于人類細胞無法繼續(xù)降解尿酸，因此尿酸必須通過腎臟和腸道排出。多數(shù)其他哺乳動物每天約 70% 的尿酸可經(jīng)尿液排出，因為尿酸可被尿酸酶進一步分解為尿囊素。然而，尿酸酶在人類早期進化過程中已經(jīng)失活。現(xiàn)代社會飲食結構發(fā)生明顯變化，高糖、高嘌呤食物攝入增加，再疊加尿酸酶缺失，使高尿酸血癥患者數(shù)量逐年增加。全球范圍內 HUA 和痛風病例也呈逐年上升趨勢。2016 年，HUA 和痛風已在全球廣泛流行；到 2020 年，相關人數(shù)已增至 9.3 億。HUA 目前已成為僅次于糖尿病的第二大常見代謝性疾病。

在臨床治療中，別嘌醇（allopurinol，AP）和非布司他等 XOD 抑制劑常用于抑制過量尿酸生成；苯溴馬隆和丙磺舒等藥物則用于促進尿酸排泄。雖然這些藥物具有明確臨床療效，但其使用受到超敏綜合征、胃腸道反應、肝功能異常和全身性皮疹等不良反應限制?；诎踩钥紤]，近年來越來越多研究開始關注植物來源成分在控制 HUA、避免肝腎損傷方面的潛力。

與合成藥物相比，中醫(yī)藥，尤其是藥食同源植物，因其療效特點、多功能屬性和較高安全性受到關注。文冠果（Xanthoceras sorbifolium Bunge，X. sorbifolium）已被正式列入 114 種中國藥食同源植物之一。其作為草本代茶飲用于治療 HUA（痛風緩解期）的功效，也被納入 2024 年內蒙古自治區(qū)中醫(yī)適宜技術目錄。已有研究顯示，多種文冠果葉提取物具有降尿酸特性。此外，研究團隊前期動物實驗已證實，文冠果葉可通過調節(jié) HUA 相關轉運蛋白減輕腎損傷。因此，文冠果葉在預防和治療 HUA 方面顯示出較大潛力。

不過，小鼠和人類尿酸代謝通路存在顯著差異，這給動物研究結果向人群轉化帶來較大困難。動物模型預測人體反應的能力受到限制，但這一點在相關研究中往往未被充分重視。因此，本研究采用“從臨床到基礎”的整合策略，直接評估文冠果葉的治療價值和機制。研究首先通過隨機對照臨床試驗評價其在 HUA 患者中的有效性和安全性；隨后利用臨床樣本進行蛋白組學分析和網(wǎng)絡藥理學篩選，識別可能機制，并在細胞模型中進行嚴格驗證。這種臨床觀察與機制研究直接連接的設計，為理解文冠果葉藥理作用提供了更具轉化意義的平臺。

02

重要發(fā)現(xiàn)及亮點

高尿酸血癥患者的年齡和性別分布特征

本研究共納入 120 例 HUA 患者，年齡范圍為 19–60 歲。在全部病例中，19–25 歲年齡組高尿酸血癥患者比例為 11.7%，隨后隨年齡增長逐漸上升，并在 36–40 歲年齡組達到峰值，占 16.7%。此后，患者比例開始下降，在 60–65 歲年齡組降至 0.83%。

研究還觀察到，在 120 例 HUA 患者中，男性 107 例，女性 13 例，男性患者比例明顯更高。男性患者分布于多個年齡段，其中年輕和中年男性，尤其是 30–44 歲人群病例數(shù)最多。相比之下，女性患者主要集中于 50–59 歲年齡段，提示中老年女性更容易出現(xiàn) HUA。

圖1：文冠果形態(tài)特征及 HUA 患者統(tǒng)計分析。（A）文冠果植株。（B）文冠果葉。（C）由文冠果葉制備的茶飲。（D）高尿酸血癥患者的年齡分布。（E）高尿酸血癥患者的年齡和性別分布。

飲用文冠果葉茶后 HUA 患者生化指標變化

隨后，為直觀展示文冠果的治療效果，研究者對納入的 120 例高尿酸血癥患者進行藥物干預，并觀察多項指標變化。研究采用隨機分組方法，將患者分為文冠果葉干預組（n=60）和非布司他對照組（n=60）。文冠果葉干預組年齡范圍為 20–60 歲，平均年齡為 37.20±9.57 歲；體重指數(shù)（BMI）范圍為 22.00–43.00 kg/m2，平均 BMI 為 27.79±4.46 kg/m2。非布司他對照組年齡范圍為 19–60 歲，平均年齡為 41.13±11.09 歲；BMI 范圍為 17.00–36.30 kg/m2，平均 BMI 為 27.48±4.00 kg/m2。兩組 BMI 差異無統(tǒng)計學意義（p>0.05）。

經(jīng)過 4 周干預試驗，共有 118 例患者（98.3%）完成全部研究訪視，其中文冠果葉組 60 例，非布司他組 58 例。非布司他組有 2 例患者出現(xiàn)肝酶升高，停藥后逐漸改善。

臨床結果顯示，患者飲用文冠果葉茶后血清 UA 水平顯著下降。同時，服用文冠果葉的患者血清甘油三酯（TG）和總膽固醇（CHOL）也顯著降低，且未檢測到異常變化，提示文冠果葉未造成肝腎功能損害，臨床使用安全性較好。t 檢驗結果顯示，文冠果葉降低尿酸的幅度與常用降尿酸藥物非布司他的降尿酸幅度無統(tǒng)計學差異。此外，肌酐（CRE）、丙氨酸氨基轉移酶（ALT）和天冬氨酸氨基轉移酶（AST）等指標也未見顯著差異。

研究者進一步基于各項指標降低率的頻率分布進行分析，發(fā)現(xiàn)文冠果葉組各指標降低率相對集中，整體趨勢較一致，未出現(xiàn)特別異常的離群值。相比之下，非布司他組降低率分布更分散，雖然也觀察到降低趨勢，但個體之間療效差異似乎更大。

圖2：文冠果葉治療對 HUA 患者臨床參數(shù)的影響。（A–G）接受文冠果葉治療（HUA+EX）或非布司他治療（HUA+Febux）的 HUA 患者，在基線、終點及兩者差值中的血清尿酸（UA）、肌酐（CRE）、甘油三酯（TG）、總膽固醇（CHOL）、葡萄糖（GLU）、丙氨酸氨基轉移酶（ALT）和天冬氨酸氨基轉移酶（AST）水平。數(shù)據(jù)以均值 ± 標準差（SD）表示（n=60）。****p<0.0001，***p<0.001，**p<0.01，*p<0.05，與 HUA 組相比；ns，差異無統(tǒng)計學意義（p>0.05）。（H）文冠果葉組和非布司他組按年齡分層（青年、中年、老年）的 UA 降低率。不同字母（a）表示年齡組之間存在顯著差異（p<0.05）。（I）EX Leaf 組和非布司他組按性別分層（男性、女性）的 UA 降低率；ns，差異無統(tǒng)計學意義（p>0.05）。（J–P）XSB 組和 Febux 組血清 UA、CRE、TG、CHOL、GLU、ALT 和 AST 在基線（藍色箱線圖）和終點（綠色箱線圖）的箱線圖，離群值以空心圓表示。*p<0.05，表示同一組內基線與終點之間差異顯著。

圖3：接受文冠果（EX）或非布司他（Febux）治療的 HUA 患者生化參數(shù)降低率的頻率分布。（A）UA 降低率。（B）肌酐（CRE）降低率。（C）甘油三酯（TG）降低率。（D）總膽固醇（CHOL）降低率。（E）葡萄糖（GLU）降低率。（F）丙氨酸氨基轉移酶（ALT）降低率。（G）天冬氨酸氨基轉移酶（AST）降低率。

HUA 患者血清蛋白組學分析提示炎癥與代謝通路參與文冠果葉作用

為全面分析文冠果葉提取物在 HUA 患者治療中的作用及機制，研究者進行了血清蛋白組學分析，并在不同樣本組之間識別差異表達蛋白（DEPs）。結果顯示，HUA 組中共有 115 個差異表達蛋白，其中 39 個上調，76 個下調；文冠果治療組中也識別出 115 個差異表達蛋白，其中 8 個上調，107 個下調。

研究者進一步繪制了對照組、HUA 組和 EX 組差異表達蛋白表達水平的熱圖，并識別出在治療條件下表達顯著逆轉的蛋白。隨后，研究者利用 GO 和 KEGG 數(shù)據(jù)庫對這些差異表達蛋白進行功能注釋和富集分析，以探索其在生物學過程中的潛在作用。

GO 富集分析顯示，這些蛋白參與多個生物學過程，主要富集條目包括對外源性刺激的反應、神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育、細胞內信號轉導、整合素介導的信號通路、免疫反應、細胞分化、細胞周期以及鈣介導信號等。在細胞組分類別中，差異表達基因顯著富集于膜運輸系統(tǒng)、高爾基體、內質網(wǎng)、過氧化物酶體、蛋白酶體核心復合體、谷氨酸受體、內質網(wǎng)腔、細胞質囊泡、自噬相關結構和線粒體膜等。在分子功能方面，其主要富集于 ATP 結合和 DNA 結合類別。KEGG 富集分析顯示，與應激反應、神經(jīng)發(fā)育、細胞信號和代謝過程相關的關鍵蛋白發(fā)生顯著變化，提示這些生物通路可能在實驗條件下受到明顯調控。

圖4：HUA 患者血液蛋白組學特征及文冠果治療作用。（A，B）差異表達蛋白（DEPs）火山圖：（A）對照組 vs. HUA 組；（B）HUA 組 vs. 文冠果（EX）組。圖中標示上調蛋白（紅色）、下調蛋白（綠色）和無顯著差異蛋白（灰色）。（C）對照組、HUA 組和 EX 組 DEPs 的層次聚類熱圖，顯示不同表達模式。（D，E）DEPs 的基因本體（GO）富集分析：（D）對照組 vs. HUA 組；（E）HUA 組 vs. EX 組，按生物過程、細胞組分和分子功能分類。（F，G）KEGG 通路富集氣泡圖：（F）對照組 vs. HUA 組；（G）EX 組 vs. HUA 組。x 軸表示富集因子，y 軸列出富集通路，氣泡大小表示該通路中 DEPs 數(shù)量，顏色對應 P 值（紫色到紅色表示顯著性由高到低）。

網(wǎng)絡藥理學分析揭示文冠果葉化學成分及潛在作用靶點

為明確文冠果葉降尿酸活性的藥效物質基礎，研究者收集不同產(chǎn)地的文冠果葉樣品，制備相應提取物，并開展系統(tǒng)化學成分分析。共準確鑒定出 69 種化合物，覆蓋 11 類結構類型，包括 26 種黃酮類、12 種氨基酸及其衍生物、9 種生物堿、7 種萜類、5 種木脂素和香豆素、4 種酚酸、2 種黃酮醇苷、1 種核苷酸及其衍生物、1 種黃酮醇、1 種醌類和 1 種三萜類。

在此基礎上，研究者利用網(wǎng)絡藥理學篩選文冠果葉治療 HUA 的潛在靶點和分子機制。通過 SwissTargetPrediction 數(shù)據(jù)庫對已鑒定化學成分進行靶點預測和去重后，獲得 104 個候選藥物靶點；同時整合多個公共疾病數(shù)據(jù)庫并去重后，獲得 316 個 HUA 相關治療靶點。兩組靶點取交集后，篩選出文冠果抗 HUA 的 12 個重疊核心靶點。這 12 個靶點被導入 STRING 數(shù)據(jù)庫構建蛋白-蛋白相互作用（PPI）網(wǎng)絡。網(wǎng)絡中節(jié)點大小與度值正相關，較大節(jié)點代表更關鍵的核心靶點。結果顯示，腫瘤壞死因子（TNF）和血管緊張素轉換酶（ACE）等關鍵因子被識別為核心調控節(jié)點。KEGG 通路富集分析顯示，最顯著富集通路包括代謝通路、酒精性肝病通路、PI3K/AKT 信號通路和花生四烯酸代謝通路。

研究者隨后在 Cytoscape 3.8.0 中構建成分-靶點調控網(wǎng)絡，以關聯(lián)活性成分和靶點。該網(wǎng)絡包含 11 個活性成分、114 個節(jié)點和 1508 條邊。研究篩選出排名最高的 4 個核心成分：myricetin-3-O-rutinoside、槲皮苷（quercitrin）、蘆?。╮utin）和楊梅苷（myricitrin）。HPLC 定量檢測顯示，這 4 個成分在不同地區(qū)樣品中的含量穩(wěn)定且一致，分別為：myricitrin 10.1202–17.2002 mg/g，quercitrin 3.8666–5.7068 mg/g，rutin 3.0768–6.3907 mg/g，myricetin-3-O-rutinoside 5.9302–14.7843 mg/g，說明不同來源文冠果葉具有較好的質量一致性。

為了在細胞水平驗證 4 個單體化合物的降尿酸活性，研究者建立了 UA 誘導的 HUA 細胞模型，并使用小鼠肝細胞系 AML12 和人腎近端小管細胞系 HK-2 進行實驗。結果顯示，槲皮苷、蘆丁和楊梅苷可顯著降低細胞內 UA 水平，其效果與陽性對照非布司他一致；而 myricetin-3-O-rutinoside 與模型組相比未表現(xiàn)出統(tǒng)計學顯著的降尿酸作用。此外，在服用文冠果葉茶的 HUA 患者尿液中檢測到了這 3 種活性成分，提示它們可能是主要活性物質。

研究者進一步將 3 個關鍵成分與 12 個 HUA 核心靶點進行分子對接，以驗證網(wǎng)絡藥理學識別的靶點相互作用。結合能被用作評價指標，數(shù)值越低表示結合親和力越強。結果顯示，在 3 個成分中，AKR1B1 的結合能最低，提示其結合能力最強。已有研究證實，AKR1B1 缺失可抑制內源性果糖生成和糖酵解，而果糖代謝紊亂會加速 UA 合成并誘導痛風等代謝性疾病?？傮w而言，分子對接結果支持網(wǎng)絡藥理學預測，初步提示文冠果葉可能主要通過槲皮苷、蘆丁和楊梅苷結合核心靶點，尤其是 AKR1B1，并調控關鍵代謝和炎癥通路，從而發(fā)揮降尿酸作用。

圖5：文冠果治療 HUA 分子機制的網(wǎng)絡藥理學分析。（A）文冠果主要化學成分的分類及比例。（B）文冠果與 HUA 重疊靶點的維恩圖。（C）核心共同靶點的蛋白-蛋白相互作用（PPI）網(wǎng)絡分析。（D）潛在靶點的京都基因與基因組百科全書（KEGG）通路富集分析。（E）藥材-成分-靶點調控網(wǎng)絡。（F）分子對接結合能熱圖。（G–H）單體化合物在 AML12（G）和 HK2（H）細胞中的降尿酸作用（n=5）。（I）分子對接驗證：文冠果關鍵活性成分與核心靶蛋白之間的結合模式。#<0.01，##<0.001，與對照組相比；*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001，與模型組相比；ns，差異無統(tǒng)計學意義（p>0.05）。

文冠果葉提取物抑制 HUA 細胞模型中的尿酸合成與重吸收

為進一步研究 EX 治療 HUA 的潛在分子機制，研究者采用體外細胞模型開展了一系列驗證實驗。首先，研究者使用 CCK-8 法評價 EX 對細胞活力的影響。結果顯示，100 μg/ml 濃度下，EX 對 AML12 和 HK-2 細胞均表現(xiàn)出明顯細胞毒性?；谶@一結果，研究者選擇 12.5–50 μg/ml 作為后續(xù)療效評價濃度范圍。

在 HUA 細胞模型中，研究者采用多種策略模擬尿酸代謝異常。對于 AML12 細胞，研究者一方面用 40 mM UA 直接刺激細胞，以模擬高尿酸環(huán)境對肝細胞的直接損傷；另一方面使用腺苷/黃嘌呤氧化酶（XOD）刺激細胞，以模擬尿酸生成過程。對于 HK-2 細胞，由于其不參與尿酸合成，模型僅通過 UA 刺激建立。實驗結果顯示，與對照組相比，40 mM UA 或腺苷/XOD 處理后，AML12 和 HK-2 細胞上清中的 UA 水平均顯著升高（p<0.05）。而 12.5、25 和 50 μg/ml EX 可劑量依賴性降低細胞內 UA 水平，其中 50 μg/ml 組降尿酸效果最顯著（p<0.05）。

隨后，研究者從尿酸生成和尿酸排泄兩個關鍵方面分析 EX 的作用機制。就尿酸生成而言，肝臟是尿酸合成的主要器官，XOD 是該過程中的限速酶。因此，研究者檢測了不同處理組 AML12 細胞中 XOD 活性變化。結果顯示，兩種處理方法建立的模型組中，XOD 活性均顯著高于對照組（p<0.001）；而 EX 干預組可劑量依賴性顯著抑制 XOD 活性升高（p<0.01）。在 50 μg/ml 濃度下，EX 對 XOD 的抑制作用甚至強于非布司他。這提示 EX 可能通過抑制 XOD 活性減少尿酸生成，從而發(fā)揮降尿酸作用。

在尿酸排泄方面，研究者使用 Western blot 檢測腎臟尿酸轉運蛋白表達變化。結果顯示，在 HUA 模型組中，與尿酸排泄相關的 ABCG2 和 OAT1 蛋白表達顯著下調，而與尿酸重吸收相關的 GLUT9 和 URAT1 蛋白表達顯著上調。這種“排泄減少、重吸收增加”的狀態(tài)共同加重體內尿酸蓄積。EX 干預可有效逆轉這些變化，提示其可能通過調節(jié)腎臟轉運蛋白表達，促進尿酸排泄并抑制尿酸重吸收，從而協(xié)同降低尿酸水平。

圖6：EX 在 HUA 細胞模型中降尿酸作用及分子機制的體外驗證。（A，B）不同濃度 EX（12.5–200 μg/ml）處理 AML12（A）和 HK2（B）細胞后的細胞活力，采用 CCK-8 法檢測（n=5）。（C，D）AML12 細胞中的 UA 水平：（C）腺苷+XOD 誘導的 HUA 模型；（D）UA 負荷模型，細胞經(jīng) EX（12.5–50 μg/ml）或非布司他（陽性對照）處理。（E）UA 負荷 HK2 細胞中的 UA 水平，細胞經(jīng) EX 或非布司他處理。（F，G）AML12 細胞中的 XOD 活性：（F）腺苷+XOD 模型；（G）UA 負荷模型，細胞經(jīng) EX 或非布司他處理。（H）HK2 細胞中尿酸轉運蛋白 OAT1、ABCG2、GLUT9 和 URAT1 的 Western blot 分析。（I）OAT1、ABCG2、GLUT9 和 URAT1 蛋白表達水平的定量分析，并歸一化至 β-actin。<0.05，#<0.01，##<0.001，與對照組相比；*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001，與模型組相比；ns，差異無統(tǒng)計學意義。

文冠果葉提取物抑制炎癥因子釋放和細胞凋亡

高尿酸血癥不僅表現(xiàn)為血清 UA 水平升高，還伴隨炎癥反應和細胞凋亡，并可能進一步損傷肝臟、腎臟等靶器官。結合血清蛋白組學和網(wǎng)絡藥理學分析結果，研究者發(fā)現(xiàn)，EX 干預后，差異表達蛋白顯著富集于“免疫反應”和“細胞死亡”等生物學過程。此外，網(wǎng)絡藥理學篩選發(fā)現(xiàn) TNF 等炎癥相關核心靶點。這些結果提示，EX 可能通過調節(jié)炎癥和凋亡通路發(fā)揮肝腎保護作用。

為進一步驗證這一假設，研究者在 AML12 肝細胞和 HK-2 腎小管上皮細胞損傷模型中，檢測 EX 對炎癥因子釋放、細胞凋亡水平及相關信號通路的調控作用。研究者使用 ELISA 檢測 AML12 和 HK-2 細胞上清中主要炎癥因子 TNF-α、IL-1β 和 IL-6 的濃度。結果顯示，與對照組相比，模型組上清中 TNF-α、IL-1β 和 IL-6 水平均顯著升高（p<0.01）。EX 處理可劑量依賴性顯著抑制這三種炎癥因子的釋放（p<0.01）。

Western blot 分析進一步顯示，與對照組相比，模型組炎癥相關蛋白 COX-1 和 COX-2 水平顯著升高（p<0.001）。不同濃度 EX 處理后，兩種細胞中異常升高的 COX-1 和 COX-2 蛋白表達均呈劑量依賴性顯著下降（p<0.05 或 p<0.01）。高劑量處理組 COX-1 蛋白表達水平甚至恢復至接近對照組正常水平。此外，研究者發(fā)現(xiàn)兩種細胞系對照組中 COX-2 表達不可檢測，但 UA 處理后顯著升高，而 EX 處理可有效逆轉這一變化，提示 EX 具有較強抗炎作用。

同時，研究者采用 Annexin V-FITC/PI 雙染結合流式細胞術評估 AML12 和 HK-2 細胞凋亡。結果顯示，在兩種細胞類型中，與對照組相比，UA 處理均顯著誘導細胞凋亡；而不同劑量 EX 預處理可劑量依賴性顯著降低凋亡細胞比例（p<0.05）。這說明，除抗炎作用外，抑制細胞凋亡也是 EX 治療 HUA 的重要分子機制之一。

圖7：EX 緩解 HUA 細胞模型中的炎癥反應并抑制細胞凋亡。（A–F）AML12（A–C）和 HK2（D–F）細胞中促炎細胞因子水平：IL-1β（A，D）、IL-6（B，E）和 TNF-α（C，F(xiàn)），在 EX（12.5–50 μg/ml）或非布司他（陽性對照）處理后通過 ELISA 檢測。（G）AML12 和 HK2 細胞中 COX1 和 COX2 的 Western blot 分析。（H–K）AML12（H，I）和 HK2（J，K）細胞中 COX1（H，J）和 COX2（I，K）表達的定量分析，并歸一化至 β-actin。（L）AML12（上方）和 HK2（下方）細胞凋亡水平的流式細胞術分析，顯示對照組、模型組、非布司他組和 EX 50 μg/ml 組中凋亡細胞分布。##<0.001，與對照組相比；*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001，與模型組相比；ns，差異無統(tǒng)計學意義。

文冠果葉提取物通過調節(jié) PI3K/AKT 信號通路干預 HUA

上述結果證實，EX 可有效抑制 UA 誘導的炎癥反應和細胞凋亡。為進一步研究上游信號機制，研究者采用蛋白組學和網(wǎng)絡藥理學整合策略篩選核心通路，最終鎖定 PI3K/AKT 信號通路。雖然 PI3K/AKT 通路在血清蛋白組學 KEGG 分析中并未進入前 20 個最顯著富集條目，但它是差異表達蛋白富集分析和網(wǎng)絡藥理學預測共同識別出的通路之一。

這一選擇還受到多方面證據(jù)支持：首先，研究團隊前期動物研究顯示，文冠果葉可通過調節(jié) PI3K/AKT 通路改善高尿酸血癥腎病；其次，多種與 PI3K/AKT 信號功能相關的差異表達蛋白，如 PIK3R1、GRB10、PDGFA、ROCK1、CDC42、PARP1、PDCD5、SOD1/3、MMP2/14 等，在 EX 干預后發(fā)生顯著逆轉；第三，既往文獻已證實 PI3K/AKT 信號通路在 HUA 和痛風中可關鍵調節(jié)尿酸生成、腎臟尿酸轉運、炎癥和凋亡。尤其是，該通路在炎癥和凋亡兩個 HUA 誘導肝腎損傷的關鍵病理過程中處于中心位置。因此，PI3K/AKT 通路被最終選為機制驗證的核心靶點。

Western blot 分析顯示，在 HK2 細胞中，與對照組相比，UA 處理顯著降低 p-PI3K 和 p-AKT 水平（p<0.01），說明 PI3K-AKT 信號通路在該細胞模型中受到抑制。EX 干預后，p-PI3K 和 p-AKT 表達水平呈劑量依賴性顯著恢復（p<0.05 或 p<0.01），并回歸正常水平。相比之下，在 AML12 細胞中，與對照組相比，UA 處理顯著上調 p-PI3K 和 p-AKT 表達水平（p<0.01），而總 PI3K 和 AKT 蛋白水平無明顯變化，提示該模型成功激活了 PI3K/AKT 信號通路。EX 干預后，模型誘導的 p-PI3K 和 p-AKT 升高被劑量依賴性顯著抑制（p<0.01），這與最初預期相反。基于此，研究者推測 PI3K-AKT 信號通路具有組織特異性，在不同細胞類型中發(fā)揮不同功能。

AKT 存在 AKT1、AKT2 和 AKT3 三種亞型。盡管三者序列高度相似，但在組織分布、生理功能和病理作用方面存在差異。由于研究者已發(fā)現(xiàn) PI3K-AKT 信號通路在兩種細胞類型中表現(xiàn)不同，因此推測這種差異可能與特定 AKT 亞型有關。qPCR 檢測結果顯示，在 AML12 細胞中，模型組 AKT1 和 AKT2 表達顯著高于對照組，而 AKT3 表達未顯著升高；在 HK2 細胞中，模型組 AKT1 和 AKT2 表達顯著低于對照組，AKT3 表達同樣未見明顯變化。

為進一步探索 EX 治療 HUA 時 PI3K-AKT 信號通路的作用機制，研究者使用 siRNA 技術選擇性抑制 AML12 和 HK2 細胞中 AKT1 和 AKT2 表達。結果顯示，在 AML12 細胞中，siRNA 敲低 AKT2 可顯著提高 Bcl-2/Bax 蛋白比值。流式細胞術結果進一步顯示，抑制 AKT2 可顯著減少細胞凋亡，而抑制 AKT1 對凋亡未產(chǎn)生顯著影響。相比之下，在 HK2 細胞中，siRNA 敲低 AKT1 或 AKT2 均可顯著提高 Bcl-2/Bax 蛋白比值，流式細胞術也顯示抑制 AKT1 或 AKT2 均可顯著減少凋亡。這提示在 AML12 細胞中，AKT2 可能發(fā)揮主要作用；而在 HK2 細胞中，AKT1 和 AKT2 共同發(fā)揮作用。

隨后，研究者檢測了沉默 AKT1 和 AKT2 對炎癥因子的影響。結果顯示，抑制 AKT1 可顯著降低 AML12 細胞中 TNF-α、IL-1β 和 IL-6 的表達；相反，抑制 AKT2 表達則增加 IL-6 濃度。這進一步提示 AKT 不同亞型在不同細胞類型和不同病理環(huán)節(jié)中具有差異化功能。

圖8：EX 調節(jié) HUA 細胞模型中的 PI3K/AKT 通路。（A，D）AML12（A）和 HK2（D）細胞中 p-PI3K、總 PI3K、p-AKT、總 AKT 和 β-actin 的 Western blot 結果。（B，C，E，F(xiàn)）p-PI3K/PI3K（B，C）和 p-AKT/AKT（E，F(xiàn)）比值的定量分析。（G，K）AML12（G）和 HK2（K）細胞中 AKT1/2/3 的 mRNA 表達。（H，I，L，M）轉染對照 siRNA 或 siAKT1/siAKT2 的細胞中 AKT1（H，L）和 AKT2（I，M）的 mRNA 表達。數(shù)據(jù)以均值 ± SD 表示。*p<0.05，**p<0.01，與對照 siRNA 相比。數(shù)據(jù)以均值 ± SD 表示（n=3）。<0.05，#<0.01，與對照組相比；*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001，與模型組相比；ns，差異無統(tǒng)計學意義。

圖9：siAKT 減輕 AML12 和 HK2 細胞中 UA 誘導的凋亡和炎癥反應。（A，C）Bcl-2 和 Bax 表達的 Western blot 分析。（B，D）Bcl-2/Bax 比值的定量分析。（E，F(xiàn)）細胞凋亡的流式細胞術分析。（G–L）ELISA 檢測 IL-1β、TNF-α 和 IL-6 水平。數(shù)據(jù)以均值 ± SD 表示。組間比較采用單因素方差分析。<0.05，#<0.01，##<0.001，###<0.0001，與對照組相比；*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001，與模型組相比；ns，差異無統(tǒng)計學意義。

綜合機制總結

綜合臨床研究、血清蛋白組學、網(wǎng)絡藥理學和細胞實驗結果，文冠果葉并非僅通過單一降尿酸路徑發(fā)揮作用。其核心機制包括三個層面：第一，在肝細胞中抑制 XOD 活性，減少尿酸生成；第二，在腎小管上皮細胞中調節(jié)尿酸轉運蛋白，上調 ABCG2 和 OAT1，降低 GLUT9 和 URAT1，從而促進尿酸排泄并減少尿酸重吸收；第三，通過調節(jié)炎癥反應、細胞凋亡和 PI3K/AKT 信號通路，對高尿酸狀態(tài)下的肝腎細胞損傷發(fā)揮保護作用。

值得注意的是，該研究提出文冠果葉對 PI3K/AKT 通路具有組織選擇性調節(jié)特征。在肝細胞中，UA 誘導 PI3K/AKT/COX-2 軸過度激活，而 EX 可抑制這一過度激活，從而減輕炎癥反應；在腎細胞中，UA 抑制 PI3K/AKT 活性，而 EX 可恢復該通路活性，從而抑制尿酸誘導的細胞凋亡。換言之，文冠果葉并非簡單地“激活”或“抑制”某一通路，而是在不同組織病理狀態(tài)下呈現(xiàn)雙向調節(jié)特征。

【Citation】:Liu, Y., Hua, C., Wu, Y., Lv, X., Hei, D., Qiao, L., Han, G., A, R., Xie, Y., & Li, M. Evaluation of the clinical efficacy of Xanthoceras sorbifolium leaves in intervening in hyperuricemia and research on its uric acid-lowering mechanism.Phytomedicine, 157, 158289 (2026).

【貢獻】★★★★★

本研究通過臨床研究與基礎實驗相結合的方式，證實了文冠果葉用于 HUA 干預的有效性和安全性。文冠果葉并不是單一功能的降尿酸物質，其作用更可能來自多成分、多靶點、多通路的綜合調控。

具體而言，文冠果葉可通過抑制尿酸合成、促進尿酸排泄，并發(fā)揮抗炎和抗凋亡作用來干預 HUA；其中包括對 PI3K/AKT 信號通路的選擇性調控以及組織特異性作用。這些機制有助于減輕 HUA 相關炎癥和代謝異常引起的腎臟、肝臟組織損傷。

該研究不僅為文冠果葉開發(fā)為降尿酸天然來源干預物提供了較為系統(tǒng)的科學依據(jù)，也為天然藥物干預代謝性疾病提供了新的研究思路。

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