Phytomedicine (1區(qū))丨陳皮、荷葉、澤瀉如何降脂？蛋白質(zhì)組學(xué)鎖定ACADSB/CES1/BAAT三大特異靶點(diǎn)！(劉鄂湖/陳倩倩/秦冰—南京...

2026年5月14日，南京中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院劉鄂湖、陳倩倩、秦冰團(tuán)隊(duì)等，聯(lián)合山西中醫(yī)藥大學(xué)中藥與食品工程學(xué)院，在Phytomedicine（中科院1區(qū) TOP，2024 Impact Factor = 8.3）在線發(fā)表題為“Comparative analysis of lipid-lowering mechanisms in efficacy-divergent traditional Chinese medicines”的研究論文。該文于2025年10月31日投稿，2026年4月13日修回，2026年5月11日接收，2026年5月14日在線發(fā)表。

該研究聚焦高脂血癥背景下不同功效類別中藥的降脂機(jī)制差異，選取陳皮（Citri Reticulatae Pericarpium，CRP）、荷葉（Nelumbinis Folium，NF）和澤瀉（Alismatis Rhizoma，AR）三味臨床常用中藥，分別構(gòu)建 PA/OA 誘導(dǎo)的 HepG2 細(xì)胞脂質(zhì)負(fù)荷模型和高脂飲食誘導(dǎo)的小鼠高脂血癥模型，系統(tǒng)比較水提物與醇水提取物的降脂效果。結(jié)果顯示，三味中藥的醇水提取物整體表現(xiàn)出優(yōu)于水提物的降脂活性。

進(jìn)一步通過非標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組學(xué)、分子對(duì)接、細(xì)胞熱轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)以及過表達(dá)/敲低功能驗(yàn)證，研究鑒定出三味中藥各自的特異性作用靶點(diǎn)：陳皮主要關(guān)聯(lián) ACADSB，荷葉主要關(guān)聯(lián) CES1，澤瀉主要關(guān)聯(lián) BAAT；同時(shí)，三者還共同調(diào)控 OAT、GSTM3、PCK1 和 RBP4 等共享靶點(diǎn)。該研究提示，不同傳統(tǒng)功效類別的中藥在改善脂質(zhì)代謝紊亂時(shí)，可能遵循“特異靶點(diǎn) + 共享調(diào)控網(wǎng)絡(luò)”的多靶點(diǎn)作用模式，為從現(xiàn)代蛋白質(zhì)組學(xué)角度解釋中藥降脂機(jī)制提供了新的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

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【摘要】

背景：中藥（traditional Chinese medicines，TCMs）在高脂血癥的預(yù)防和治療中顯示出一定作用，這種作用并不局限于其傳統(tǒng)功效分類。然而，不同中藥發(fā)揮降脂作用的分子機(jī)制仍未完全闡明。本研究圍繞三味臨床應(yīng)用的中藥展開，分別為陳皮（Citrus reticulata Blanco，Citri Reticulatae Pericarpium，CRP）、荷葉（Nelumbo nucifera Gaertn.，Nelumbinis Folium，NF）和澤瀉（Alisma orientale (Sam.) Juzep.，Alismatis Rhizoma，AR），比較其降脂作用及相關(guān)機(jī)制。

目的：比較三味不同功效中藥發(fā)揮降脂作用的分子機(jī)制。

方法：研究在體外采用棕櫚酸（palmitic acid，PA）和油酸（oleic acid，OA）刺激 HepG2 細(xì)胞建立脂質(zhì)負(fù)荷模型，在體內(nèi)采用高脂飲食（high-fat diet，HFD）誘導(dǎo)小鼠高脂血癥模型。分別評(píng)價(jià)三味中藥的水提物和醇水提取物。隨后利用非標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組學(xué)篩選高脂血癥模型中與脂質(zhì)代謝相關(guān)的差異表達(dá)蛋白（differentially expressed proteins，DEPs），并通過細(xì)胞熱轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)（cellular thermal shift assay，CETSA）、過表達(dá)/敲低實(shí)驗(yàn)、總膽固醇（total cholesterol，TC）和甘油三酯（triglyceride，TG）檢測等方式驗(yàn)證差異蛋白功能。

結(jié)果：與水提物相比，醇水提取物表現(xiàn)出更強(qiáng)的降脂效果。蛋白質(zhì)組學(xué)分析共發(fā)現(xiàn) 270 個(gè)差異表達(dá)蛋白。研究進(jìn)一步識(shí)別出三味中藥各自相關(guān)的特異性作用靶點(diǎn)：陳皮對(duì)應(yīng)線粒體酰基輔酶A脫氫酶（acyl-CoA dehydrogenase，mitochondrial，ACADSB），荷葉對(duì)應(yīng)肝羧酸酯酶 1（liver carboxylesterase 1，CES1），澤瀉對(duì)應(yīng)膽汁酸輔酶A：氨基酸 N-酰基轉(zhuǎn)移酶（bile acid-CoA: amino acid N-acyltransferase，BAAT）。同時(shí)，三味中藥還共享多個(gè)調(diào)控靶點(diǎn)，包括谷胱甘肽 S-轉(zhuǎn)移酶 Mu 3（glutathione S-transferase Mu 3，GSTM3）、胞質(zhì)型磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶（phosphoenolpyruvate carboxykinase，cytosolic [GTP]，PCK1）、線粒體鳥氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ornithine aminotransferase，mitochondrial，OAT）和視黃醇結(jié)合蛋白 4（retinol-binding protein 4，RBP4）。

結(jié)論：陳皮、荷葉和澤瀉可分別通過 ACADSB、CES1、BAAT 等特異性靶點(diǎn)，并共同通過 OAT、GSTM3、PCK1、RBP4 等共享靶點(diǎn)發(fā)揮降脂作用，提示中藥在脂質(zhì)代謝調(diào)控中具有多靶點(diǎn)協(xié)同調(diào)節(jié)特征。

01

研究背景及科學(xué)問題

高脂血癥是一類以血清總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白膽固醇（low-density lipoprotein cholesterol，LDL-c）升高，或高密度脂蛋白膽固醇（high-density lipoprotein cholesterol，HDL-c）降低為主要特征的代謝性疾病，也是動(dòng)脈粥樣硬化和心血管疾病的重要危險(xiǎn)因素。目前，他汀類藥物是高脂血癥治療的主要藥物之一，但長期使用可能與肌病、橫紋肌溶解等不良反應(yīng)相關(guān)。因此，尋找更安全、有效的高脂血癥干預(yù)策略仍具有現(xiàn)實(shí)需求。

中藥為高脂血癥干預(yù)提供了重要思路。按照傳統(tǒng)功效分類，相關(guān)中藥可大致包括消食類、清熱類和利水滲濕類。例如，陳皮屬于具有消食、理氣特點(diǎn)的代表性中藥；荷葉為常用的清熱類藥材；澤瀉則常被用于利水滲濕，并與脂質(zhì)調(diào)節(jié)相關(guān)。

陳皮為蕓香科植物 Citrus reticulata Blanco 的干燥成熟果皮，傳統(tǒng)上多用于改善食積、脘腹脹滿等癥狀。既往研究提示，陳皮可能與減輕肥胖、調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝、改善胰島素抵抗和肝功能有關(guān)。荷葉為 Nelumbo nucifera Gaertn. 的干燥葉，傳統(tǒng)記載其性質(zhì)較平，并與清熱作用相關(guān)；研究顯示，荷葉提取物可通過調(diào)節(jié)氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)緩解脂多糖誘導(dǎo)的小鼠腸損傷，也可呈濃度依賴性改善脂質(zhì)代謝。澤瀉為 Alisma orientale (Sam.) Juzep. 的干燥塊莖，傳統(tǒng)上認(rèn)為其性寒，具有利水、調(diào)脂等作用。

雖然陳皮、荷葉和澤瀉的傳統(tǒng)功效分類不同，但它們均顯示出一定降脂作用。這引出了兩個(gè)關(guān)鍵問題：不同功效類別的中藥是否存在共同分子靶點(diǎn)？它們的分子機(jī)制是否與傳統(tǒng)功效特點(diǎn)相對(duì)應(yīng)？本研究正是圍繞這些問題展開，對(duì)三味藥物在同一疾病背景下的降脂機(jī)制進(jìn)行比較性蛋白質(zhì)組學(xué)分析。

為此，研究建立了兩類模型：一是在體外采用 PA 和 OA 處理 HepG2 細(xì)胞，構(gòu)建脂質(zhì)負(fù)荷模型；二是在體內(nèi)采用 HFD 誘導(dǎo)小鼠高脂血癥模型。研究首先在 HepG2 細(xì)胞中比較三味中藥水提物和醇水提取物對(duì) TC、TG 的降低作用，隨后評(píng)價(jià)其體內(nèi)降脂效果，并通過非標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組學(xué)篩選不同處理組中的差異表達(dá)蛋白。最后，研究進(jìn)一步結(jié)合免疫組化、CETSA、過表達(dá)/敲低實(shí)驗(yàn)以及 TC、TG 定量檢測，驗(yàn)證這些差異蛋白在脂質(zhì)代謝中的功能。該研究有助于闡明中藥調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝的不同分子路徑，也為高脂血癥干預(yù)策略提供機(jī)制依據(jù)。

02

重要發(fā)現(xiàn)及亮點(diǎn)

三味中藥提取物的活性成分鑒定與質(zhì)量控制

研究首先對(duì)陳皮、荷葉和澤瀉提取物中的主要成分進(jìn)行分析。研究人員采用高效液相色譜（high performance liquid chromatography，HPLC）對(duì)不同批次中藥樣品的 75% 醇水提取物進(jìn)行指紋圖譜分析。

在陳皮提取物中，橙皮苷、川陳皮素和橘皮素是主要成分，其含量分別為 245.38–272.31 mg/g、58.46–60.07 mg/g 和 34.98–37.02 mg/g。在澤瀉提取物中，主要成分包括澤瀉醇 C 23-乙酸酯、澤瀉醇 A、澤瀉醇 B 和澤瀉醇 B 23-乙酸酯，含量分別為 13.65–13.91 mg/g、22.65–23.45 mg/g、53.30–57.34 mg/g 和 29.20–33.85 mg/g。對(duì)于荷葉，根據(jù)既往成分表征結(jié)果，牡荊素、槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷（quercetin-3-O-glucuronide，Q3GA）、金絲桃苷、異槲皮苷、紫云英苷、N-去甲荷葉堿和荷葉堿是其含量較高的主要化合物。

圖1：中藥提取物中主要成分的高效液相色譜（HPLC）分析。（A）在 283 nm 下檢測 Citrus reticulata Blanco（陳皮，Citri Reticulatae Pericarpium，CRP）對(duì)照品的 HPLC 圖譜。（B）在 283 nm 下檢測 CRP 提取物的 HPLC 圖譜。（C）在 330 nm 下檢測 CRP 對(duì)照品的 HPLC 圖譜。（D）在 330 nm 下檢測 CRP 提取物的 HPLC 圖譜。（E）在 208 nm 下檢測 Alisma orientale (Sam.) Juzep.（澤瀉，Alismatis Rhizoma，AR）對(duì)照品的 HPLC 圖譜。（F）在 208 nm 下檢測 AR 提取物的 HPLC 圖譜。（G）在 246 nm 下檢測 AR 對(duì)照品的 HPLC 圖譜。（H）在 246 nm 下檢測 AR 提取物的 HPLC 圖譜。

醇水提取物的降脂活性整體優(yōu)于水提物

為了確定三味中藥的合適干預(yù)濃度和提取方式，研究人員首先用 PA + OA 誘導(dǎo) HepG2 細(xì)胞發(fā)生脂質(zhì)沉積，再分別給予不同濃度的水提物和醇水提取物。結(jié)果顯示，在濃度不高于 50 μg/ml 時(shí)，各提取物對(duì)細(xì)胞活力影響較小，因此后續(xù)實(shí)驗(yàn)選擇 50 μg/ml 作為最高干預(yù)濃度。

與 PA + OA 模型組相比，三味中藥來源的六種不同提取物在 50 μg/ml 時(shí)均表現(xiàn)出不同程度的降脂活性。進(jìn)一步比較發(fā)現(xiàn)，在該濃度下，陳皮和荷葉的醇水提取物對(duì) TC 和 TG 積累的抑制作用明顯強(qiáng)于對(duì)應(yīng)水提物；澤瀉醇水提取物相較水提物主要表現(xiàn)為更強(qiáng)的 TG 降低作用。基于這些結(jié)果以及成分分析，研究后續(xù)選擇醇水提取作為三味中藥的優(yōu)選提取方式。

在機(jī)制層面，RT-qPCR 結(jié)果顯示，在高脂負(fù)荷 HepG2 細(xì)胞中，陳皮和荷葉醇水提取物可顯著下調(diào)膽固醇合成相關(guān)基因 DHCR7 的表達(dá)，同時(shí)上調(diào)膽固醇代謝相關(guān)基因 MVK 和 LDLR 的表達(dá)。陳皮還明顯下調(diào)脂肪酸合成調(diào)控因子 ACC2，并促進(jìn)膽固醇代謝基因 INSIG-1 的表達(dá)。澤瀉醇水提取物則抑制 ACC2 以及膽固醇合成基因 SQLE 的表達(dá)，并上調(diào) INSIG-1。Western blot 結(jié)果顯示，三味中藥醇水提取物均可抑制 SREBP2 表達(dá)；同時(shí)，在 PA + OA 誘導(dǎo)的 HepG2 細(xì)胞中，陳皮和荷葉還進(jìn)一步降低 SREBP1 表達(dá)。這說明這些提取物可能通過抑制膽固醇和脂肪酸合成通路，減輕細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)積累。

圖2：醇水提取物的降脂活性優(yōu)于水提物。（A–C）HepG2 細(xì)胞經(jīng)醇水提取物和水提物處理后的細(xì)胞活力（n = 5）。（D，E）HepG2 細(xì)胞中的總膽固醇（TC）和甘油三酯（TG）水平（n = 3）。（F，G）不同提取物在 HepG2 細(xì)胞中對(duì) TC 和 TG 的抑制率。（H）HepG2 細(xì)胞中膽固醇和脂肪酸代謝相關(guān)基因的相對(duì) mRNA 表達(dá)水平（n = 3）。（I）給藥后 HepG2 細(xì)胞中 SREBP1、SREBP2 的代表性 Western blot 圖像及其相對(duì)表達(dá)量定量結(jié)果（n = 3）。數(shù)據(jù)以均值 ± 標(biāo)準(zhǔn)差表示。統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性以棕櫚酸和油酸（PA + OA）組作為比較對(duì)象：* p < 0.05，** p < 0.01，*** p < 0.001，**** p < 0.0001。

三味中藥醇水提取物改善高脂飲食小鼠的代謝紊亂

為了評(píng)價(jià)三味中藥醇水提取物的體內(nèi)降脂作用，研究人員開展了為期 8 周的動(dòng)物干預(yù)實(shí)驗(yàn)。從給藥第 4 周開始，與 HFD 組相比，各提取物處理組小鼠體重明顯下降，提示醇水提取物能夠抑制高脂飲食導(dǎo)致的體重增加。與此同時(shí)，這些提取物還抑制了棕色、米色和白色脂肪組織重量的增加。組織學(xué)分析顯示，處理后棕色脂肪細(xì)胞形態(tài)得到改善，退變減輕，提示高脂飲食誘導(dǎo)的脂肪積累有所緩解。

代謝評(píng)價(jià)結(jié)果顯示，三味中藥醇水提取物均改善了小鼠葡萄糖耐量，其中荷葉和澤瀉組的口服葡萄糖耐量試驗(yàn)（oral glucose tolerance test，OGTT）曲線下面積（area under the curve，AUC）顯著低于 HFD 組。陳皮和荷葉醇水提取物還顯著降低胰島素耐量試驗(yàn)（insulin tolerance test，ITT）的 AUC。血清檢測顯示，荷葉和澤瀉處理小鼠的 TC 水平明顯下降；三味中藥處理組均表現(xiàn)出 TG 降低和 HDL-c 升高；同時(shí)，所有提取物處理均下調(diào)血清 LDL-c 水平。

RT-qPCR 進(jìn)一步證實(shí)，三味中藥醇水提取物均可抑制部分膽固醇/脂肪酸合成相關(guān)基因（Acc1、Fasn、Srebp1、Hmgcs1）以及促炎因子 Tnfα 的表達(dá)。Western blot 結(jié)果顯示，提取物給藥后，小鼠肝組織中 SREBP2 蛋白顯著下調(diào)；陳皮和荷葉還進(jìn)一步抑制 SREBP1 表達(dá)。這些結(jié)果提示，三味中藥醇水提取物可能通過協(xié)同抑制脂質(zhì)生成通路，減輕高脂飲食誘導(dǎo)的代謝紊亂。

值得注意的是，與陳皮和澤瀉相比，荷葉在抑制高脂飲食小鼠米色脂肪組織和白色脂肪組織增重方面效果更明顯。米色脂肪組織重量分別為 HFD 組 0.4041 ± 0.12 g、陳皮組 0.3058 ± 0.03 g、荷葉組 0.2273 ± 0.06 g、澤瀉組 0.2821 ± 0.07 g；白色脂肪組織重量分別為 HFD 組 0.6890 ± 0.23 g、陳皮組 0.5064 ± 0.06 g、荷葉組 0.3921 ± 0.07 g、澤瀉組 0.4535 ± 0.15 g。此外，荷葉能更全面、顯著地改善 HFD 小鼠糖代謝紊亂和胰島素抵抗，并恢復(fù)血清 TC、TG 和 HDL-c 水平。總體來看，荷葉提取物的降脂效果優(yōu)于澤瀉和陳皮。

圖3：醇水提取物在體內(nèi)的降脂活性。（A）體內(nèi)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)示意圖。（B，C）小鼠體重變化（n = 8）。（D–F）棕色、米色和白色脂肪組織重量（n = 8）。（G）蘇木精-伊紅（hematoxylin and eosin，HE）染色顯示的小鼠棕色脂肪組織代表性顯微圖像。（H，I）口服葡萄糖后不同時(shí)間點(diǎn)的血糖水平及曲線下面積（AUC）（n = 8）。（J，K）注射胰島素后不同時(shí)間點(diǎn)的血糖水平及 AUC（n = 8）。（L–O）小鼠血清總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-c）和低密度脂蛋白膽固醇（LDL-c）含量（n = 8）。（P–R）小鼠肝組織中參與膽固醇和脂肪酸代謝、脂肪酸氧化以及炎癥反應(yīng)的相關(guān)基因相對(duì) mRNA 水平（n = 3）。（S）給藥后小鼠肝組織中 SREBP1、SREBP2 的代表性 Western blot 圖像及其相對(duì)表達(dá)量定量結(jié)果（n = 3）。數(shù)據(jù)以均值 ± 標(biāo)準(zhǔn)差表示。與高脂飲食（HFD）組相比，* p < 0.05，** p < 0.01，*** p < 0.001，**** p < 0.0001。與正常對(duì)照飲食（normal control diet，NCD）組相比，# p < 0.05，## p < 0.01，### p < 0.001，#### p < 0.0001。

三味中藥醇水提取物具有肝臟保護(hù)作用

高脂飲食可導(dǎo)致肝損傷相關(guān)指標(biāo)升高。研究發(fā)現(xiàn)，醇水提取物給藥后，小鼠血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（alanine aminotransferase，ALT）和天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（aspartate aminotransferase，AST）水平顯著改善。荷葉處理可逆轉(zhuǎn) HFD 誘導(dǎo)的肝臟腫大，使肝臟重量接近 NCD 小鼠水平。

組織病理學(xué)檢查顯示，提取物干預(yù)后肝組織結(jié)構(gòu)明顯恢復(fù)。HE 染色顯示，肝細(xì)胞形態(tài)趨于正常，肝索排列更加有序，空泡變性顯著減輕，脂滴積累減少。油紅 O（Oil red O，ORO）染色也顯示，提取物干預(yù)后肝臟脂滴數(shù)量明顯下降。這些結(jié)果說明，三味中藥醇水提取物均對(duì)高脂血癥小鼠具有一定肝保護(hù)作用。

進(jìn)一步比較發(fā)現(xiàn)，澤瀉在抑制肝損傷相關(guān)指標(biāo)方面作用更突出。ALT 水平分別為 HFD 組 28.96 ± 14.84 U/l、陳皮組 8.777 ± 2.805 U/l、荷葉組 9.831 ± 3.689 U/l、澤瀉組 6.308 ± 1.355 U/l；AST 水平分別為 HFD 組 32.74 ± 19.49 U/l、陳皮組 8.597 ± 3.001 U/l、荷葉組 11.04 ± 2.451 U/l、澤瀉組 6.385 ± 1.768 U/l。澤瀉對(duì)肝組織脂滴積累的抑制也更加明顯。因此，研究認(rèn)為澤瀉在 HFD 小鼠中表現(xiàn)出最突出的肝保護(hù)效果。

圖4：醇水提取物的肝臟保護(hù)作用。（A，B）小鼠血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）和天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）含量（n = 8）。（C）小鼠肝臟重量（n = 8）。（D）HE 染色顯示的小鼠肝組織代表性顯微圖像。（E，F(xiàn)）油紅 O（ORO）染色顯示的小鼠肝組織代表性顯微圖像及脂滴定量結(jié)果（n = 3）。數(shù)據(jù)以均值 ± 標(biāo)準(zhǔn)差表示。與高脂飲食（HFD）組相比，* p < 0.05，** p < 0.01，*** p < 0.001，**** p < 0.0001。

肝組織蛋白質(zhì)組學(xué)揭示不同中藥的特異性與共同調(diào)控網(wǎng)絡(luò)

為了進(jìn)一步解析不同提取物降脂作用的分子機(jī)制，研究人員對(duì)小鼠肝組織進(jìn)行蛋白質(zhì)組學(xué)分析，比較不同組別之間的差異表達(dá)蛋白。結(jié)果顯示，在 p < 0.05 的篩選條件下，NCD 組與 HFD 組之間共鑒定到 270 個(gè)差異表達(dá)蛋白，其中 HFD 誘導(dǎo)后 141 個(gè)蛋白上調(diào)、129 個(gè)蛋白下調(diào)。陳皮、荷葉和澤瀉分別恢復(fù)了其中 59、59 和 84 個(gè)差異表達(dá)蛋白。此外，38 個(gè)蛋白在三種處理組中均表現(xiàn)出一致性恢復(fù)。

為了進(jìn)一步比較三味中藥降脂機(jī)制的差異，研究人員篩選了各處理組中被顯著恢復(fù)的特異性差異表達(dá)蛋白，并結(jié)合三味中藥的傳統(tǒng)功效特點(diǎn)進(jìn)行分析，即陳皮偏向“消食”，荷葉偏向“清熱”，澤瀉偏向“利水”。隨后，研究選擇各組中變化倍數(shù)較高的差異蛋白作為重點(diǎn)對(duì)象。結(jié)果顯示，陳皮相關(guān)的特異性蛋白為線粒體酰基輔酶A脫氫酶（ACADSB）；荷葉相關(guān)的特異性蛋白為羧酸酯酶 1D（CES1D，其人源同源蛋白為肝羧酸酯酶 1，CES1）；澤瀉相關(guān)的特異性蛋白為膽汁酸輔酶A：氨基酸 N-酰基轉(zhuǎn)移酶（BAAT）。

為了尋找不同中藥之間可能共享的調(diào)控路徑，研究人員又從共同差異蛋白中篩選出 GSTM3、PCK1、OAT、RBP4 以及 HNRNPAB，其中篩選標(biāo)準(zhǔn)為 |log2 Fold Change（FC）| > 1.2。由于 HNRNPAB 尚未被報(bào)道與代謝性疾病密切相關(guān)，因此研究后續(xù)重點(diǎn)關(guān)注 GSTM3、PCK1、OAT 和 RBP4。

通路富集分析進(jìn)一步顯示，三味中藥處理組均主要富集于代謝相關(guān)通路，脂肪酸代謝在所有給藥組中均被富集。此外，陳皮組還與補(bǔ)體和凝血級(jí)聯(lián)反應(yīng)相關(guān)。GO 富集分析也支持上述發(fā)現(xiàn)：在生物過程層面，三種提取物主要涉及脂質(zhì)代謝和脂肪酸代謝過程；在分子功能層面，陳皮組富集于轉(zhuǎn)移酶活性，而荷葉和澤瀉組則明顯富集于氧化還原酶活性；在線粒體等細(xì)胞組分方面，三組均顯示出重要關(guān)聯(lián)。整體來看，這些數(shù)據(jù)共同勾勒出肝臟脂質(zhì)代謝的核心調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，同時(shí)也揭示了不同中藥各自特異的干預(yù)節(jié)點(diǎn)。

圖5：小鼠肝組織蛋白質(zhì)組學(xué)分析。（A）非標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組學(xué)示意圖。（B–E）正常對(duì)照飲食（NCD）-高脂飲食（HFD）、Citrus reticulata Blanco（陳皮，Citri Reticulatae Pericarpium，CRP）-HFD、Nelumbo nucifera Gaertn.（荷葉，Nelumbinis Folium，NF）-HFD、Alisma orientale (Sam.) Juzep.（澤瀉，Alismatis Rhizoma，AR）-HFD 組間差異表達(dá)蛋白（DEPs）火山圖。（F–H）CRP/NF/AR 與 HFD 之間 DEPs 的 KEGG 通路富集分析。（I–Q）CRP/NF/AR 與 HFD 之間 DEPs 的 GO 通路富集分析。

GSTM3、PCK1、OAT 和 RBP4 是三味中藥提取物的共享靶點(diǎn)

為了驗(yàn)證蛋白質(zhì)組學(xué)結(jié)果，并判斷這些差異表達(dá)蛋白是否可能是三味中藥提取物的共同直接靶點(diǎn)，研究人員首先在 HepG2 細(xì)胞中檢測了 GSTM3、PCK1、OAT 和 RBP4 等關(guān)鍵基因的 mRNA 水平。結(jié)果顯示，三味中藥醇水提取物均能恢復(fù) OAT、RBP4 和 GSTM3 的 mRNA 表達(dá)；而 PCK1 表達(dá)僅在荷葉提取物處理后顯著恢復(fù)。

隨后，研究人員將各提取物中的主要活性成分與共享差異蛋白進(jìn)行分子對(duì)接分析。陳皮選取川陳皮素、橘皮素和橙皮苷；荷葉選取 Q3GA、荷葉堿和 N-去甲荷葉堿；澤瀉選取澤瀉醇 B、澤瀉醇 A 和澤瀉醇 C 23-乙酸酯。計(jì)算機(jī)對(duì)接模型顯示，這些代表性成分與共享靶點(diǎn)之間具有較好的結(jié)合構(gòu)象，并且所有成分對(duì)共享靶點(diǎn)均顯示出較強(qiáng)的預(yù)測結(jié)合能。不過，由于分子對(duì)接本身存在模擬預(yù)測的局限性，仍需要進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。

圖6：蛋白質(zhì)組學(xué)驗(yàn)證。（A）體外實(shí)驗(yàn)中 OAT、RBP4、PCK1、GSTM3 的相對(duì) mRNA 水平（n = 3）。（B–E）分子對(duì)接代表性示意圖。數(shù)據(jù)以均值 ± 標(biāo)準(zhǔn)差表示。與棕櫚酸和油酸（PA + OA）組相比，* p < 0.05，** p < 0.01，*** p < 0.001，**** p < 0.0001。與正常對(duì)照（normal control，NC）組相比，# p < 0.05，## p < 0.01，### p < 0.001，#### p < 0.0001。

ACADSB、CES1 和 BAAT 是三味中藥提取物的特異性作用靶點(diǎn)

為了進(jìn)一步驗(yàn)證蛋白質(zhì)組學(xué)篩選出的特異性靶點(diǎn)，研究人員從 mRNA 和蛋白兩個(gè)層面檢測 ACADSB、CES1 和 BAAT 的表達(dá)變化。結(jié)果顯示，陳皮處理可在體外特異性上調(diào) ACADSB mRNA，并在體內(nèi)和體外均提高 ACADSB 蛋白表達(dá)。相反，荷葉和澤瀉提取物分別明顯下調(diào) CES1 和 BAAT 的表達(dá)。

為了判斷這些差異表達(dá)蛋白是否能夠與提取物中的活性成分直接結(jié)合，研究人員進(jìn)一步采用 CETSA 評(píng)估不同處理?xiàng)l件下蛋白熱穩(wěn)定性的變化。CETSA 的 Western blot 分析顯示，在 37℃–69℃ 的溫度范圍內(nèi)，DMSO 處理組中 ACADSB、CES1、BAAT 的降解速度均快于陳皮、荷葉、澤瀉給藥組。這提示陳皮、荷葉和澤瀉提取物分別增強(qiáng)了 ACADSB、CES1 和 BAAT 的熱穩(wěn)定性。

綜合這些多維度驗(yàn)證結(jié)果，研究認(rèn)為 ACADSB、CES1 和 BAAT 是三味中藥醇水提取物發(fā)揮作用的重要治療靶點(diǎn)，并可能通過直接分子相互作用介導(dǎo)陳皮、荷葉和澤瀉的降脂效應(yīng)。

圖7：醇水提取物調(diào)控關(guān)鍵差異表達(dá)蛋白（DEPs）的表達(dá)。（A，E，I）HepG2 細(xì)胞中 ACADSB、CES1、BAAT 的相對(duì) mRNA 表達(dá)（n = 3）。（B，F(xiàn)，J）給藥后小鼠肝組織中 ACADSB、CES1、BAAT 的代表性免疫組織化學(xué)圖像及其表達(dá)定量結(jié)果（n = 3）。（C，G，K）給藥后小鼠肝組織中 ACADSB、CES1、BAAT 的代表性 Western blot 圖像。（D，H，L）給藥后 HepG2 細(xì)胞中 ACADSB、CES1、BAAT 的代表性 Western blot 圖像。（M–O）給藥后通過細(xì)胞熱轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)（CETSA）檢測 HepG2 細(xì)胞中 ACADSB、CES1、BAAT 的代表性 Western blot 圖像。數(shù)據(jù)以均值 ± 標(biāo)準(zhǔn)差表示。與棕櫚酸和油酸（PA + OA）/高脂飲食（HFD）組相比，* p < 0.05，** p < 0.01，*** p < 0.001，**** p < 0.0001。

ACADSB、CES1 和 BAAT 介導(dǎo)三味中藥各自特異的降脂作用

為了建立功能因果關(guān)系，研究人員在 HepG2 細(xì)胞中過表達(dá)或敲低 ACADSB、CES1 和 BAAT，并檢測細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)積累情況。結(jié)果顯示，在 PA + OA 誘導(dǎo)的脂質(zhì)負(fù)荷細(xì)胞中，過表達(dá) ACADSB 可顯著降低細(xì)胞內(nèi) TC 和 TG 水平；而敲低 ACADSB 則加重脂質(zhì)積累，并促進(jìn) SREBP1 和 SREBP2 表達(dá)。這表明 ACADSB 是 SREBP 通路中抑制肝細(xì)胞脂肪變性的內(nèi)源性因子。更關(guān)鍵的是，當(dāng) ACADSB 表達(dá)降低時(shí)，陳皮提取物的降脂效果顯著下降，提示 ACADSB 是陳皮發(fā)揮降脂作用不可替代的重要靶點(diǎn)。

與 ACADSB 不同，過表達(dá) CES1 或 BAAT 會(huì)增加 TC 和 TG 積累，并促進(jìn) SREBP 表達(dá)；而敲低 CES1 或 BAAT 則減輕脂質(zhì)負(fù)荷。這說明 CES1 和 BAAT 可能是 SREBP 通路中促進(jìn)肝臟脂質(zhì)滯留的因子。相應(yīng)地，荷葉和澤瀉分別需要通過抑制 CES1 或 BAAT 來發(fā)揮降脂作用；當(dāng)這兩個(gè)蛋白被敲低后，對(duì)應(yīng)提取物的進(jìn)一步降脂效果被削弱或消失。

這些獲得性和缺失性功能實(shí)驗(yàn)共同證明：陳皮通過激活 ACADSB 相關(guān)路徑發(fā)揮降脂作用，而 CES1 和 BAAT 分別是荷葉與澤瀉發(fā)揮降脂作用時(shí)需要抑制的關(guān)鍵靶點(diǎn)。

圖8：ACADSB、CES1、BAAT 是 CRP、NF、AR 在 HepG2 細(xì)胞中發(fā)揮降脂活性的潛在靶點(diǎn)。（A，G，M）通過 Western blot 驗(yàn)證 HepG2 細(xì)胞中 ACADSB、CES1、BAAT 的過表達(dá)情況。（B，C，H，I，N，O）HepG2 細(xì)胞中過表達(dá) ACADSB/CES1/BAAT 后的總膽固醇（TC）和甘油三酯（TG）含量（n = 3）。（D，J，P）通過 Western blot 驗(yàn)證 HepG2 細(xì)胞中 ACADSB、CES1、BAAT 的敲低情況。（E，F(xiàn)，K，L，Q，R）HepG2 細(xì)胞中敲低 ACADSB/CES1/BAAT 后的 TC 和 TG 含量（n = 3）。數(shù)據(jù)以均值 ± 標(biāo)準(zhǔn)差表示。與棕櫚酸和油酸（PA + OA）組相比，* p < 0.05，** p < 0.01，*** p < 0.001，**** p < 0.0001。

機(jī)制示意圖總結(jié)

研究最后將陳皮、荷葉和澤瀉改善高脂血癥的作用機(jī)制整合為一個(gè)多靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)。總體而言，三味中藥既具有各自特異的主要作用節(jié)點(diǎn)，也存在共同調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)：陳皮主要與 ACADSB 相關(guān)，荷葉主要與 CES1 相關(guān)，澤瀉主要與 BAAT 相關(guān)；同時(shí)，三者又共同涉及 OAT、RBP4、PCK1 和 GSTM3 等調(diào)節(jié)節(jié)點(diǎn)。這一結(jié)果提示，不同功效類別的中藥可能通過“特異靶點(diǎn) + 共享網(wǎng)絡(luò)”的方式共同參與肝臟脂質(zhì)穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié)。

圖9：CRP、NF、AR 緩解高脂血癥作用的示意圖。

【貢獻(xiàn)】★★★★★

本研究鑒定出KCMF1–AMPK軸是MASLD中此前未被認(rèn)識(shí)到的調(diào)控通路，并支持KCMF1可能成為潛在治療靶點(diǎn)。調(diào)控這一軸線可能恢復(fù)AMPK信號(hào)，改善MASLD的代謝異常和病理特征，從而為現(xiàn)有治療策略提供一種補(bǔ)充性思路。

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